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专利号: 2015101893516
申请人: 南通大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-11-13
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种仿生siRNA胶束纳米复合物,其特征在于:包括壳聚糖、阳离子材料、疏水长链醛、靶向配体和穿内涵体小肽,所述的复合物为以壳聚糖为骨架,阳离子材料和疏水长链醛为核心,靶向配体和穿内涵体小肽通过PEG、腙键共价修饰的仿生型siRNA胶束纳米载体;所述的壳聚糖的分子量为50000~200000;所述的阳离子材料为精氨酸、组氨酸或赖氨酸;所述的靶向配体为脱氧氨基葡萄糖、叶酸、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽或表皮细胞生长因子;

所述的PEG的分子量为1500~10000;所述的疏水长链醛为正丁醛、己醛、辛醛、癸醛或十二烷基醛;所述穿内涵体小肽为HA2、L2、蜂毒肽或E5。

2.权利要求1所述的仿生siRNA胶束纳米复合物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:

1)胶束亲水外壳的构建:

1.1壳聚糖骨架上修饰羧基:将邻苯二甲酸酐溶于体积比为19:1的DMF/H2O溶液中,搅拌后按邻苯二甲酸酐与壳聚糖单元体的摩尔比为5~1:1加入壳聚糖,加热反应得到氨基保护的壳聚糖,氨基保护的壳聚糖单元体与溴代乙酸乙酯按摩尔比为1:1~5反应;

1.2 PEG-靶向配体复合物的制备:一端带有CHO的PEG与靶向配体按摩尔比为1:1~5混合,采用DCC/NHS体系进行催化羧基,形成酰胺键,得到CHO-PEG-靶向配体的复合物进一步与水合肼以摩尔比1:1~20反应,得到含腙键的PEG-配体复合物;

1.3将修饰了羧基的壳聚糖采用DCC/NHS体系进行活化后,按壳聚糖单元体与含腙键的PEG-配体复合物摩尔比为1~10:1反应,反应产物与水合肼以摩尔比1:3将产物中保护氨基的壳聚糖脱保护,得到壳聚糖-PEG-靶向配体溶液;

1.4穿内涵体小肽的修饰:选用EDC/NHS体系将小肽羧基活化后,以壳聚糖单元体与小肽的摩尔比为1:0.2~2加入到壳聚糖-PEG-靶向配体溶液中;

2)胶束疏水核心的构建:

2.1 Boc-L-赖氨酸与疏水长链醛按摩尔比1:3反应,搅拌过夜后再加入硼氢化钠反应后,用乙醚进行萃取分离,将反应产物溶于体积比7:3的二氯甲烷/三氟乙酸体系脱去L-赖氨酸氨基上的Boc保护;

2.2赖氨酸与长链醛的反应产物与带正电荷的氨基酸反应:按带正电荷的氨基酸与EDC、NHS的摩尔比1:1.2:1.5用EDC/NHS体系活化后,将步骤2.1产物与活化的带正电荷的氨基酸溶液按摩尔比为1:1~5反应过夜,加入足量乙酸乙酯萃取分离;

3)亲水疏水修饰壳聚糖自组装成胶束:

将疏水核心用DMF溶液溶解,然后使用EDC/NHS体系活化过夜,按疏水核心与壳聚糖单元体的摩尔比为1:0.5~3加入化学修饰壳聚糖骨架得到的胶束亲水外壳,反应12小时后透析,在水溶液中自组装成胶束。

3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤1.1中邻苯二甲酸酐与壳聚糖单元体的摩尔比为3:1,氨基保护的壳聚糖单元体与溴代乙酸乙酯的摩尔比为1:2。

4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤1.2中PEG与靶向配体的摩尔比为

1:2,PEG与DCC、NHS的摩尔比优选1:1.2:1.5,所述的CHO-PEG-靶向配体复合物与水合肼的摩尔比为1:10。

5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤1.3中所述的活化条件为修饰了羧基的壳聚糖单元体与DCC、NHS的摩尔比为1:1.2:1.5,所述的壳聚糖单元体与含腙键的PEG-配体复合物摩尔比为2~5:1。

6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤2.2中赖氨酸与长链醛的反应产物与带正电荷的氨基酸的摩尔比为1:1.5。

7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤3)中疏水核心与壳聚糖单元体的摩尔比为1:1。

8.权利要求1所述的仿生siRNA胶束纳米复合物作为药物载体的应用。