1.一种番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)供试番茄顶芽样品前处理;2)配制流动相、设置色谱条件;3)标准液的制备;4)专属性考察;5)线性关系考察;6)样品含量测定;
所述步骤1)的方法包括提取、石油醚萃取后进行减压蒸发,再调节pH,并经乙酸乙酯萃取后,最后经二次减压蒸发制成样品待测液;
所述步骤2)中流动相为甲醇与0.075%冰乙酸配制而成;
所述标准液和所述样品含量测定的植物激素包括IAA、ZT、ABA和GA3。
2.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:所述步骤1)的具体方法包括:
1-1)提取:供试番茄顶芽样品加入冷甲醇中,于4℃下静置16h浸提,抽滤得清液,得粗提取液;
1-2)石油醚萃取:将所述粗提取液用等体积石油醚萃取,弃去醚相,合并水相;
1-3)减压蒸发:将步骤1-2)所得的所述水相在37℃下旋转蒸发至所述水相体积的
1/3~1/4,得一次浓缩液;
1-4)调节pH:将所述一次浓缩液调节pH至2.75~2.85之间;
1-5)乙酸乙酯萃取:将调节好pH的一次浓缩液用等体积乙酸乙酯萃取,弃去水相,合并酯相;
1-6)二次减压蒸发:将步骤1-5)所得的所述酯相在37℃下旋转蒸发至所述酯相体积的1/4~1/5,得二次浓缩液,用甲醇定容至所述二次浓缩液体积的2倍,制成样品待测液,保存于4℃下棕色瓶中,待测。
3.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:所述步骤2)中所述流动相为:甲醇与0.075%冰乙酸按体积比为45:55配制流动相。
4.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:所述步骤2)中,色谱条件设置为检测波长210nm,流速为0.7mL/min,进样量为20μL。
5.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:步骤
3)中,所述标准液包括:0.1g/L的IAA标准液、0.001g/L的ZT标准液、0.001g/L的ABA标准液和0.01g/L的GA3标准液。
6.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:所述步骤4)中,在步骤2)所述的色谱条件下,专属性考察包括对所述番茄顶芽样品中的IAA、ZT、ABA和GA3进行HPLC分离检测。
7.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:所述步骤5)的具体方法为:分别量取经所述步骤3)制成的IAA、ZT、ABA和GA3标准液各1mL,在10mL的棕色容量瓶中用甲醇定容,过滤、进样并检测,以4种混标峰面积与相应质量浓度进行线性回归分析。
8.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:所述步骤6)的具体方法为:将步骤1)制成的所述样品待测液,过滤进样,按外标法以峰面积计算所述番茄顶芽样品中IAA、ZT、ABA和GA3的含量。
9.根据权利要求1所述的番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法,其特征在于:完成所述步骤6)后,进行加标回收率试验,具体方法为:分别配制0.01g/L的IAA、ZT、ABA和GA3二号标准液,4℃保存;将步骤1)制成的所述样品待测液中分别加入等体积的所述二号标准液,按外标法以峰面积测定植物激素含量,计算加标回收率。