1.利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于,利用紫外分光光度计作为检测工具构建鸟苷紫外指纹图谱,从而构建紫外指纹图谱与鸟苷生成量关系的数学模型,通过模型实现鸟苷产量的在线检测,具体操作包括下列步骤:步骤(1),模型建立:
A、鸟苷发酵:
1)菌种活化
取平板上的单菌落划线接种于活化斜面,36-38℃恒温静置培养12-14h;
2)种子培养
接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有种子培养基的摇瓶中,纱布封口,置于往复式摇床上,36-37℃振荡培养12-18h,得到种子液;
3)鸟苷发酵
将上述种子液以10%的接种量接入装有发酵培养基的三角瓶中,置于往复式摇床上,
36-37℃,培养72h,获得发酵液;
B、取步骤(1)经过充分混匀的发酵液,用蒸馏水稀释500倍,得到待测发酵液样品;
设置紫外分光光度计采集条件为:对待测发酵液样品进行紫外光谱扫描,其波长扫描范围为210-300nm,采样间隔1nm,光谱带宽0.1nm,扫描速度为1nm/s,其参比为蒸馏水,测定在
250nm,260nm,280nm,290nm处的吸光度;
C、纸层析法测定鸟苷产量:将发酵液沸水浴4-6min,离心取上层清液,上清液点样,纸层析测定;
D、根据测得的鸟苷产量与紫外吸光度,得到鸟苷产量与紫外吸光度A250、A260、A280和A290之间的函数关系为:c=15.7653*A250-26.5632*A260+59.2183*A280-55.0967*A290其中,c为鸟苷产量,A250、A260、A280、A290分别为此时发酵液在250nm,260nm,280nm,290nm处的吸光度;
步骤(2),模型验证:
按步骤(1)的A步骤分别进行2-5次发酵,取其不同时间段的发酵液用蒸馏水稀释500倍后按步骤(1)的B步骤设置紫外光谱采集条件,分别测定相应波长吸光值,根据所建模型预测鸟苷产量,并与实际产量进行比较分析;预测值与实际值相对误差的绝对值平均小于
5%;其中,实际产量采用步骤(1)的C步骤进行测定;
步骤(3)模型应用:
按步骤(1)建立的模型,取待测发酵液用蒸馏水稀释500倍,得到待测发酵液样品,备用;按步骤(1)的B步骤设置紫外光谱采集条件,以蒸馏水为参比,依次扫描待测发酵液样品的紫外光谱,并测定相应波长的吸光值,利用建立模型预测鸟苷产量,获得该发酵液中的鸟苷产量。
2.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)模型建立中所述的种子培养时,接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有15mL种子培养基的250mL摇瓶中。
3.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)模型建立中种子培养时,纱布封口的纱布层数为8层。
4.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)模型建立中种子培养时,往复式摇床的冲程76mm,速度为108r/min。
5.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)模型建立中鸟苷发酵时,将上述种子液以10%的接种量接入装有
20ml发酵培养基的500ml三角瓶中。
6.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)模型建立中鸟苷发酵时,往复式摇床的冲程为76mm,速度为108r/min。
7.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)中纸层析法测定鸟苷产量中离心的速度为3000r/min,离心的时间为5min。
8.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)中纸层析法测定鸟苷产量中上清液点样量为10μL。
9.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于步骤(1)中纸层析法测定鸟苷产量中纸层析测定的展开剂为异丙醇∶氨水∶水=7∶2∶1。
10.根据权利要求1所述的利用鸟苷发酵液紫外指纹图谱检测鸟苷产量模型的构建方法,其特征在于,利用紫外分光光度计作为检测工具构建鸟苷紫外指纹图谱,从而构建紫外指纹图谱与鸟苷生成量关系的数学模型,通过模型实现鸟苷产量的在线检测,具体操作包括下列步骤:步骤(1),模型建立:
A、鸟苷发酵:
1)菌种活化
取平板上的单菌落划线接种于活化斜面,37℃恒温静置培养13h;
2)种子培养
接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有15mL种子培养基的250mL摇瓶中,8层纱布封口,置于往复式摇床上,冲程76mm,速度为108r/min,36.5℃振荡培养16h,得到种子液;
3)鸟苷发酵
将上述种子液以10%的接种量接入装有20ml发酵培养基的500ml三角瓶中,置于往复式摇床上,冲程76mm,速度为108r/min,36.5℃,培养72h,获得发酵液;
B、取步骤(1)经过充分混匀的发酵液,用蒸馏水稀释500倍,得到待测发酵液样品;
设置紫外分光光度计采集条件为:对待测发酵液样品进行紫外光谱扫描,其波长扫描范围为210-300nm,采样间隔1nm,光谱带宽0.1nm,扫描速度为1nm/s,其参比为蒸馏水,测定在
250nm,260nm,280nm,290nm处的吸光度;
C、纸层析法测定鸟苷产量:将发酵液沸水浴5min,离心取上层清液,离心的速度为
3000r/min,离心的时间为5min,上清液点样10μL,纸层析测定,展开剂为异丙醇∶氨水∶水=7∶2∶1;
D、根据测得的鸟苷产量与紫外吸光度,得到鸟苷产量与紫外吸光度A250、A260、A280和A290之间的函数关系为:c=15.7653*A250-26.5632*A260+59.2183*A280-55.0967*A290其中,c为鸟苷产量,A250、A260、A280、A290分别为此时发酵液在250nm,260nm,280nm,290nm处的吸光度;
步骤(2),模型验证:
按步骤(1)的A步骤分别进行4次发酵,取其不同时间段的发酵液用蒸馏水稀释500倍后按步骤(1)的B步骤设置紫外光谱采集条件,分别测定相应波长吸光值,根据所建模型预测鸟苷产量,并与实际产量进行比较分析;预测值与实际值相对误差的绝对值平均小于
5%;其中,实际产量采用步骤(1)的C步骤进行测定;
步骤(3)模型应用:
按步骤(1)建立的模型,取待测发酵液用蒸馏水稀释500倍,得到待测发酵液样品,备用;按步骤(1)的B步骤设置紫外光谱采集条件,以蒸馏水为参比,依次扫描待测发酵液样品的紫外光谱,并测定相应波长的吸光值,利用建立模型预测鸟苷产量,获得该发酵液中的鸟苷产量。