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专利号: 2014104561151
申请人: 河南科技学院
专利类型:发明专利
专利状态:无效专利
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于包括如下步骤:步骤(1),发酵液样品采集和制备:

1)菌种活化

取平板上的单菌落划线接种于活化斜面,36-38℃恒温静置培养12-14h;

2)种子培养

接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有种子培养基的摇瓶中,纱布封口,置于往复式摇床上,36-37℃振荡培养12-18h,得到种子液;

3)鸟苷发酵

将上述种子液以10%的接种量接入装有发酵培养基的三角瓶中,置于往复式摇床上或发酵罐中,36-37℃,培养72h,获得发酵液;

4)采集

将10批次的鸟苷发酵每隔9h从三个平行样品中分别采集3份发酵液样品,其中0-27h所采样品为发酵前期样品、27-45h的样品为发酵中期样品,45-72h的样品为发酵后期样品;

步骤(2),发酵液鸟苷含量的测定:

发酵液中鸟苷含量采用常用的高效液相色谱法定量测定;

步骤(3),光谱采集:

利用红外光谱仪采集光谱,以空气为参比,对步骤(1)得到的发酵前、中、后期样品的发酵液分别重复扫描次数5次,取平均光谱;

步骤(4),鸟苷发酵液红外吸收特征峰位置的确定:利用纯水、鸟苷标准品及发酵上层清液为对照,确定发酵液红外特征峰的位置;

步骤(5),鸟苷发酵前、中、后期指纹图谱的构建:以鸟苷发酵液特征峰为主要研究对象,根据步骤(2)测定的发酵液中的鸟苷含量,研究鸟苷发酵前、中、后期红外吸收图谱特征,构建指纹图谱;

步骤(6),指纹图谱的验证:

10批次摇床及5批次发酵罐验证指纹图谱可靠性;

所述的红外光谱的波长范围为4000-600cm-1;

所述的发酵罐发酵的温度为36℃,pH6.5,溶氧30-40%;

所述的红外光谱仪为德国BRUKER Tensor 27红外光谱仪。

2.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于步骤(1)中所述的种子培养时,接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有15mL种子培养基的250mL摇瓶中。

3.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于步骤(1)中种子培养时,纱布封口的纱布层数为8层。

4.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于步骤(1)中种子培养和鸟苷发酵时,往复式摇床的冲程76mm,速度为108r/min。

5.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于步骤(1)中鸟苷发酵时,将上述种子液以10%的接种量接入装有20ml发酵培养基的500ml三角瓶中。

6.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于步骤(1)中10批次为往复式摇床和发酵罐发酵各5批。

7.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于所述的发酵罐发酵的发酵罐为10L,转速600转/分,填料系数0.7。

8.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法,其特征在于所述的鸟苷发酵每隔9h从三个平行样品中分别采集1ml的3份发酵液样品。