1.一种快速定量检测氨基酸脱羧酶的比色方法，其特征在于，其具体步骤如下：(1)反应液与显色液试剂组成及配制

反应液：即配即用，将试剂2溶于试剂1中即可；

试剂1：50mmol/L Tris，pH7.5，10mmol/L MgCl2，2mmol/L PEP单环已胺盐，5mmol/L氨基酸；

所述的氨基酸为待检测的氨基酸脱羧酶对应的氨基酸；

试剂2：5U/mg PEP羧化酶；

显色液：试剂3：50mg/ml固紫B，1％吐温-80溶液；

试剂4：脱羧酶标准品

以上溶液均采用无CO2双蒸水配制；

(2)标准曲线试剂配制

将脱羧酶标准品配制成0，0.001，0.002，0.003，0.004，0.005，0.006，0.007，0.008U/μL浓度梯度的酶溶液，溶剂为匀浆介质；

所述的匀浆介质的配方为：pH 7.4，0.01mol/L Tris-Hcl，0.0001mol/L EDTA-2Na，

0.01mol/L蔗糖，0.8％的氯化钠溶液；

(3)标准曲线的制备

①移取450μL反应液到离心管；

②加入50μL步骤(2)中配制的标准品，上下颠倒数次，混匀；

③37℃下孵育1h，每隔10min上下颠倒混匀数次；

④加入25μL显色液与反应体系中，上下颠倒数次，混匀；

⑤静置5min，1cm光径，蒸馏水调零，520nm，测各管吸光度(OD)值；

⑥重复实验步骤①至⑤9次；

⑦构建标准曲线：纵坐标Y轴为吸光单位的实际读数；横坐标X轴为标准脱羧酶酶活力单位，活力单位的数值为标准品酶浓度×50μL；

(4)待测样品测定方法

①移取450μL反应液到离心管；

②向离心管中加入50μL待测样品或50μL匀浆介质；上下颠倒数次，混匀；

③37℃下孵育1h，每隔10min上下颠倒混匀数次；加入25μL显色液于反应体系中，上下颠倒数次，混匀；

④静置5min，1cm光径，蒸馏水调零，520nm，测各管吸光值OD；

⑤根据OD实际和标准曲线计算样品对应的酶浓度E实际，U/μL，E实际与曲线x的值的对应关系为：E实际＝x/50；

⑥计算样品比活力：E样品＝E实际×样品稀释倍数÷样品总蛋白浓度。

2.根据权利要求1所述的比色方法，所述的待测样品，其制备方法如下：对于微生物溶液样品，10000rpm，离心5min，倾去上清，用生理盐水或PBS反复清洗沉淀

2～3次，再10000rpm，离心5min，倾尽上清，用生理盐水稀释至0.8OD，取10mL，10000rpm，离心5min，倾尽上清，加入500μL匀浆介质或500μL生理盐水，将离心管插入冰中，用振幅30微米超声处理20s，置于冰上冷却，反复超声处理3次，使细胞破碎，放进4℃台式离心机15min，速度为16000g，小心移去500μL上清液到新的预冷的1.5mL离心管置于冰槽里，检测总蛋白含量待用；

对于动物组织样品，称取组织样品1g于4℃稳定后的冰生理盐水或PBS缓冲液反复漂洗

2～3次，每次不得低于5mL，除尽杂质，滤纸吸干，再次称重，置于10mL离心管中插入冰中待用；将组织样本放入10mL离心管中，用移液枪取预冷的匀浆介质，匀浆介质的体积总量是组织块重量的9倍，用移液枪取总量2/3的匀浆介质于离心管中，用干净预冷的剪刀将组织块剪碎入离心管中，用组织匀浆机10000～15000rpm上下研磨成10％的组织匀浆，匀浆10s/次，间歇30s，连续3～5次，整个过程需要在冰水中进行直至研磨均匀，最后将剩余的1/3匀浆介质冲洗匀浆机刀口，液体收集于匀浆用的离心管中；制备好的10％匀浆用低温低速离心机2000rpm左右离心10～15min，小心的移取上清液分装于预冷的1.5mL离心管中，检测总蛋白含量待用。