1. 一种L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶的应用,其特征在于,所述L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶在磷酸吡哆醛作为辅酶的条件下,催化L‑天冬氨酸发生脱羧反应生成β‑丙氨酸,L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,原始编码基因序列如序列表中SEQ ID NO.2所示;
所述应用方法包括以下步骤:
(1)重组大肠杆菌构建:将SEQ ID NO.3所示基因编码序列克隆到高表达载体,转化到大肠杆菌合适菌株中,构建基因工程菌;
(2)发酵培养:将1 3%工程菌接种至含卡那霉素30 60μg/mL 的TB培养基中,30 40℃培~ ~ ~养4 5h后加诱导剂IPTG至终浓度为0.2 0.6mmol/L,并将温度降至20 28℃诱导目的蛋白的~ ~ ~表达,继续培养16‑25小时,结束发酵,收集菌体备用;
(3)β‑丙氨酸的生产:将发酵得到的湿菌体通过全细胞催化法生产β‑丙氨酸;或者从发酵得到的湿菌体提取得到L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶催化生产β‑丙氨酸。
2. 根据权利要求1所述一种L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶的应用,其特征在于,所述步骤(1)具体步骤如下:将SEQ ID NO.3所示DNA片段利用NdeI和BamHI酶切位点克隆到表达载体pET
28a(+),得到pET28a(+)‑MpADC重组质粒,将其转化到大肠杆菌感受态细胞,获得了高表达的重组大肠杆菌。
3.根据权利要求1所述一种L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶的应用,其特征在于,所述步骤(3)中:全细胞催化法生产β‑丙氨酸方法如下:将发酵得到的湿菌体、底物L‑天冬氨酸以及磷酸吡哆醛组成转化体系,反应得到β‑丙氨酸。
4.根据权利要求2所述一种L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶的应用,其特征在于,所述转化体系中磷酸吡哆醛的浓度为0‑5mmol/L,反应温度为30 40℃,反应pH为6.0 8.0。
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