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专利号: 2014102694801
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法,其特征在于:按照白花蛇舌草与水重量比1:8~12的料液比配制提取液,在提取液中添加纤维素酶热水浸提,80%醇沉,脱蛋白,脱色素,最后精制而成;

具体按如下步骤进行:

(1)热水浸提:将白花蛇舌草进行粉碎,过40目筛,按1:8~12重量比的料液比加入水配制成白花蛇舌草提取液;用磷酸缓冲液调节pH为7,加入1.5~2.5%的纤维素酶,混匀,55℃水浴搅拌加热提取60分钟,抽滤得滤液;将滤渣按1:8~12重量比的料液比加入水,用磷酸缓冲液调节pH为7,再加入1.5~2.5%的纤维素酶,混匀,55℃水浴搅拌加热提取60分钟再提取一次,抽滤得滤液,合并两次滤液,对滤液进行90℃灭活酶10分钟;

(2)浓缩:将滤液真空旋转减压浓缩至浓度为含生药0.5~1克/毫升,放至室温;

(3)第一次醇沉:在浓缩液中加入95%乙醇至醇浓度为80%,边加边搅拌,密封盖严,静置24~48小时;抽滤,得白花蛇舌草粗多糖;

(4)脱蛋白:将白花蛇舌草粗多糖加适量水溶解,加等体积5%的三氯乙酸,边加边搅拌,静置60分钟,3000rmp离心5分钟,取上清液,再重复以上操作进行第二次脱蛋白,得脱蛋白多糖溶液;

(5)第二次醇沉:在脱蛋白后的白花蛇舌草多糖液中加入95%乙醇至醇浓度为80%,边加边搅拌,密封盖严,静置24~48小时;抽滤,用无水乙醇洗涤2-3次,真空干燥,得白花蛇舌草多糖;

(6)脱色素:将白花蛇舌草多糖用适量水溶解,加入重量1%的活性炭,混匀,加热至

80℃温度搅拌30分钟,过滤,收取滤液;将滤液加入重量1%的活性炭,混匀,加热至80℃温度搅拌30分钟,过滤,得脱色素白花蛇舌草多糖溶液;

(7)第三次醇沉:将脱色素白花蛇舌草多糖液加入95%乙醇至醇浓度为80%,边加边搅拌,密封盖严,静置24小时;抽滤,用无水乙醇洗涤2-3次,真空干燥,得精制白花蛇舌草多糖。

2.根据权利要求1所述的纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法,其特征在于:(1)取白花蛇舌草进行粉碎,过40目筛,称取白花蛇舌草粉末20克,加水至200毫升,混合均匀;用磷酸缓冲液调节pH为7左右,在料液中添加2%的纤维素酶,混匀,55℃水浴搅拌浸提60分钟;对滤渣进行第二次热水浸提,加水至200毫升,混合均匀,用磷酸缓冲液调节pH为7左右,添加2%的纤维素酶,混匀,55℃水浴搅拌浸提60分钟,抽滤得滤液,合并二次滤液进行90℃灭活酶10分钟;

(2)浓缩:将滤液真空旋转减压浓缩至30~40毫升,放至室温;

(3)第一次醇沉:以上制备的浓缩液中加入95%乙醇至醇浓度为80%,边加边搅拌,密封盖严,静置24小时;抽滤,真空干燥,得白花蛇舌草粗多糖;

(4)第一次脱蛋白:将以上所制得的白花蛇舌草粗多糖加20~30毫升超纯水溶解,加等体积5%的三氯乙酸,边加边搅拌,静置60分钟,3000rmp离心5分钟,取上清液;

(5)第二次脱蛋白:将上清液再加等体积5%的三氯乙酸,边加边搅拌,静置60分钟,

3000rmp离心5分钟,取上清液,得脱蛋白多糖溶液;

(6)第二次醇沉:以上脱蛋白多糖溶液中加入95%乙醇至醇浓度为80%,边加边搅拌,密封盖严,静置24小时;进行抽滤,用无水乙醇洗涤2~3次,脱蛋白多糖与无水乙醇w:v为1:3~5kg/L,真空干燥,得脱蛋白多糖;

(7)第一次脱色素:将以上制得的脱蛋白多糖加20~30毫升超纯水溶解,按照1%重量加入活性炭,搅匀,加热至80℃搅拌30分钟,过滤,取滤液;

(8)第二次脱色素:将以上所得滤液再按照1%浓度加入活性炭搅匀,加热至80℃搅拌

30分钟,过滤,取滤液;

(9)第三次醇沉:将以上制得的脱色素多糖液加入95%乙醇至醇浓度为80%,边加边搅拌,密封盖严,静置24小时;抽滤,无水乙醇洗涤2-3次,真空干燥,得白花蛇舌草精制多糖1.76~1.79克。