1.一种制备土大黄苷和丹叶大黄素的方法,包括如下步骤:
1)将胡芦巴种子粉碎后于乙醇水溶液中回流提取,收集提取液,浓缩,得到胡芦巴提取物;
2)将步骤1)所得胡芦巴提取物用去离子水溶解后,用石油醚萃取,收集下层清液再用乙酸乙酯萃取,收集下层清液再用正丁醇萃取,收集上层萃取液后浓缩,得到待分离样品;
3)用高速逆流色谱法对步骤2)所得待分离样品进行分离,依次得到流分I和II;其中,所述流分I中含有土大黄苷;所述流分II中含有丹叶大黄素;
所述高速逆流色谱法中的固定相和流动相按照如下方法制备:将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水混匀后静置分层,分别收集上层溶剂和下层溶剂,分别进行超声,以上层溶剂为固定相,下层溶剂为流动相;
所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为1~3:6~10:2~6:10~14;
所述上样溶液为将步骤2)所得待分离样品溶于所述流动相而得。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤1)粉碎步骤中,粉碎后胡芦巴种子的目数为40-60目;
所述乙醇水溶液的质量百分浓度为40-80%;
粉碎后的胡芦巴种子与乙醇水溶液的用量比为1g:10-30mL;
所述提取步骤中,提取次数为1-5次,具体为3次;
所述浓缩步骤中,浓缩所得胡芦巴提取物中,固形物的质量百分含量为35-62%。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述步骤2)溶解步骤中,胡芦巴提取物与去离子水的用量比为1g:5-15mL;
所述萃取步骤中,萃取所用溶剂与待萃取物质的体积比均为1:0.5-1.5,具体为1:1;
萃取次数均为2-10次;
所述浓缩步骤中,温度为50-70℃;浓缩所得待分离样品中,固形物的质量百分含量为
15-30%。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于:所述步骤3)分离步骤包括:向高速逆流色谱仪的分离管中泵入所述固定相,保持分离管温度为25~35℃,以800~900rpm的转速正转10~20分钟后泵入所述流动相,待体系平衡后,泵入所述上样溶液。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法,其特征在于:所述上样溶液的流速为
1.5-2.5mL/min;
所述待分离样品与流动相的用量比为40~160mg:10mL;
所述泵入上样溶液的次数至少为一次,具体为1-6次,更具体为1-4次;
所述分离步骤中,检测波长为320nm;
所述超声步骤中,超声的时间为10-30分钟。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述泵入上样溶液的次数为一次时,流分I和流分II出峰时间依次为50-110分钟和80-180分钟。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述泵入上样溶液的次数至少为两次时,流分I的出峰时间依次为60-90分钟、200-230分钟、320-350分钟和430-460分钟;
流分II的出峰时间依次为100-130分钟、240-270分钟、350-380分钟和465-490分钟。
8.根据权利要求5或7所述的方法,其特征在于:所述泵入上样溶液的次数为4次,第一次至第四次泵入上样溶液的时间依次为体系平衡后第0分钟、第145分钟、第250分钟和第340分钟。