1. 一种诱导博落回花药离体单倍体胚胎发生及植株再生的方法,其特征在于,包括如 下步骤:1)外植体的采取与消毒:取处于盛花期的,长度在2-12mm的博落回花蕾消毒后,将花 蕾轻轻拨开,拔取雄蕊,切除花丝,留下花药作为外植体,备用;2)胚性愈伤组织的诱导培养:将步骤1)消毒的花药接种到BLCG+2,4-D0. 5〜3. Omg/ L+6-BA0. 5mg/L培养基上,在温度25± 1°C,光照强度1000〜3000Lx,光照时间16〜18h/d 的条件下进行胚性愈伤组织的诱导,培养30〜40d后得到愈伤组织;3)花药胚状体诱导培养:将步骤2)得到的愈伤组织转接后形成胚状体;4)体细胞胚胎萌发与成苗培养:将步骤3)得到的胚状体转接后形成生根的完整植株;5)再生苗的移栽与培养:将生根苗移栽到炼苗基质中炼苗后,再进行正常的水肥管理。
2.根据权利要求1所述的诱导博落回花药离体单倍体胚胎发生及植株再生的方法, 其特征在于,步骤1)所述的外植体的采取与消毒的过程具体为:取处于盛花期的,长度在 2-12mm的博落回花蕾,用蒸馏水清洗,在超净工作台上用无菌水冲洗干净;用70%酒精浸泡 10s,再用0. 1%升汞溶液浸泡8〜lOmin消毒灭菌后用无菌水冲洗3〜4次;将花蕾轻轻拨 开,拔取雄蕊,切除花丝,留下花药作为外植体,放于无菌干燥的滤纸上吸干水分,备用。
3.根据权利要求1所述的诱导博落回花药离体单倍体胚胎发生及植株再生的方法,其 特征在于,步骤3)所述的花药胚状体诱导培养过程具体为:将步骤2)得到的愈伤组织转接 到 MS+2,4-D0. 5 〜lmg/L+6-BA0. 5mg/L 培养基上,在温度 25± 1°C,光照强度 1000_3000Lx, 光照时间16-18h/d的条件下进行胚状体的诱导培养,20天后形成胚状体。
4.根据权利要求1所述的诱导博落回花药离体单倍体胚胎发生及植株再生的方法,其 特征在于,步骤4)所述的体细胞胚胎萌发与成苗培养过程为:将步骤3)得到的胚状体转接 到 MS+GA30 〜lmg/L+IAAO 〜0. 25mg/L+KT0 〜0. 25mg/L 培养基上,在温度 25± 1°C,光照强 度1000-3000LX,光照时间16〜18h/d的条件下培养10〜15天形成生根的完整植株。
5.根据权利要求1所述的诱导博落回花药离体单倍体胚胎发生及植株再生的方法,其 特征在于,步骤5)的具体过程如下:将生根苗,移栽到泥炭土 :木质泥炭土:椰糠粉:蛭石 =1:1:1:1的炼苗基质中,浇透水,并用塑料小棚罩住小苗,保证棚类湿度不低于80%,在温 度25土 1°C,光照强度为30001X下培养,小苗适应培养环境两周后,移除塑料棚,进行正常 的水肥管理。
6.根据权利要求1-5任一项所述的诱导博落回花药离体单倍体胚胎发生及植株再生 的方法,其特征在于,胚性愈伤组织诱导培养基:BLCG+2,4-DO. 5mg/L+6-BA0. 5mg/L ;花药胚状体诱导培养基:MS+2,4-D0. 5mg/L+6-BA0. 5mg/L ;体细胞胚胎萌发与成苗培养基:MS+GA30. 5mg/L。