1.一种洋葱组织培养的方法,其特征在于,其步骤如下:(1)将收获的新鲜洋葱球置于4-5℃环境中冷藏3-4周;
(2)将冷藏后的洋葱球剥除外皮至直径为2-3cm,然后对它进行消毒处理,消毒后用无菌水冲洗干净;
(3)在无菌条件下将消毒处理后的洋葱球切除至鳞茎盘为1-2mm厚、贴近鳞茎盘的鳞茎的长、宽各为4-5mm、高为0.5-1mm的外植体,再用刀片在鳞茎上表面做“井”字形划痕,然后将外植体接种到洋葱增殖培养基I或II中;
(4)经过20-30天的培养,获得已长出若干个侧芽的无菌材料;然后按下述方法对无菌材料进行扩繁:将无菌材料置于消毒好的培养皿中,再将侧芽从鳞茎上切下或掰下并转到洋葱增殖培养基III或IV中培养20-30天,获得已长出丛生芽的无菌材料,其后每20-30天就可扩繁一次;当扩繁过程中出现玻璃化现象时,则使用增殖培养基V或VI进行培养;
扩繁过程中,含多效唑的增殖培养基不连续使用,含间苯三酚的增殖培养基不连续使用;
(5)将扩繁得到的洋葱单株壮苗转入生根培养基中进行培养,培养温度为20-25℃,培养至洋葱生根后,打开培养器皿的封口,再继续培养1-2天后将洋葱苗从培养器皿中取出,洗净根部附着的培养基,移入装有沙土的盆中,于自然光照条件下,白天22-25℃、夜间
11-15℃的条件下培养20-30天,得成活洋葱苗;
所述的洋葱增殖培养基I是由以下重量配比的原料组成:单位:mg/l,花宝3号 3000-4000;6-BA 4-7;
NAA 0.1-0.6; 蔗糖 30000;
琼脂8000; 其余为纯净水;pH为5.8;
所述的洋葱增殖培养基III除含有洋葱增殖培养基I中所述的重量配比的全部原料外,还含有重量配比为0.2-0.5的多效唑;其pH为5.8;
所述的洋葱增殖培养基V除含有洋葱增殖培养基I中所述的重量配比的全部原料外,还含有重量配比为0.2-0.5的间苯三酚;其pH为5.8;
所述的洋葱增殖培养基II是由以下重量配比的原料组成:单位:mg/l,NH4NO3 1600-1700; KNO3 1800-1900;
KH2PO3 170-180; CaCl2·2H2O 400-450;
MgSO4·7H2O 350-380;FeSO4·7H2O 26-28;
Na2-EDTA 35-40; MnSO4·4H2O 20-25;
ZnSO4·7H2O 7-10; H3BO3 5-7;
KI 0.5-1; Na2MoO4·2H2O 0.2-0.3;
CuSO4·5H2O 0.02-0.03;CoCl2·6H2O 0.02-0.03;
肌醇 88-100; 甘氨酸 2-5;
盐酸硫胺素 0.3-0.5; 盐酸吡哆素 0.3-0.5;
烟酸 0.3-0.5; 6-BA 4-7;
NAA 0.1-0.6; 蔗糖 30000;
琼脂 8000; 其余为纯净水;pH为5.8;
所述的洋葱增殖培养基IV除含有洋葱增殖培养基II中所述的重量配比的全部原料外,还含有重量配比为0.2-0.5的多效唑;其pH为5.8;
所述的洋葱增殖培养基VI除含有洋葱增殖培养基II中所述的重量配比的全部原料外,还含有重量配比为0.2-0.5的间苯三酚;其pH为5.8;
洋葱生根培养基是由以下重量配比的原料组成:单位:mg/l,NH4NO3 800-850; KNO3 900-950;
KH2PO3 85-90; CaCl2·2H2O 200-225;
MgSO4·7H2O 175-190; FeSO4·7H2O 26-28;
Na2-EDTA 35-40; MnSO4·4H2O 20-25;
ZnSO4·7H2O 7-10; H3BO3 5-7;
KI 0.5-1; Na2MoO4·2H2O 0.2-0.3;
CuSO4·5H2O 0.02-0.03;CoCl2·6H2O 0.02-0.03;
肌醇 88-100; 甘氨酸 2-5;
盐酸硫胺素 0.3-0.5; 盐酸吡哆素 0.3-0.5;
烟酸 0.3-0.5; IBA 1-2;
NAA 0.01-0.06; 蔗糖 30000;
琼脂 8000; 其余为纯净水;pH 5.8。
2.根据权利要求1所述的洋葱组织培养的方法,其特征在于:步骤(2)所述的消毒采用下述方法:在无菌条件下取洋葱球用75%以上的酒精摇晃浸泡30-60秒,再用质量百分比为0.1%的升汞溶液摇晃浸泡10-15分钟。