1.海胆棘壳色素的制备方法,其特征在于操作步骤为:
(一)原料的预处理:去除性腺的海胆棘壳,用清水冲洗,烘干后,粉碎至粒度达到
20~200目备用;
(二)研磨:用0.5~10%(w/w)研磨助剂和上述粉碎后的海胆棘壳粉混匀后采用研磨机研磨10~120分钟;
所述研磨助剂为柠檬酸或磷酸二氢钠;
(三)海胆棘壳色素的提取与纯化:
(1)研磨后的海胆棘壳与研磨助剂混合物用5~30倍体积的酸性溶液浸提,浸提温度
10~60℃,浸提时间为0.1~10h,浸提液经过滤除去不溶颗粒杂质后于10~60℃真空浓缩,得膏状母液;
所述酸性浸提液为含有酸、有机溶剂的水溶液,其体积百分比为:酸 5~20
有机溶剂 25~30
水 50~65
所述酸为甲酸、乙酸或盐酸;所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮;
(2)将夹带剂无水乙醇和上述膏状母液按质量比1∶100~100∶1的比例均匀混合后加入萃取釜,CO2经冷凝升压后进入萃取釜,控制萃取温度30~60℃,压力20~50MPa,萃取时间0.5~8小时,萃取后的溶剂进入分离釜,一级分离温度30~60℃,分离压力8~
20MPa,二级分离温度30~40℃,分离压力2~7MPa,得到含有海胆棘壳色素的溶液,减压浓缩后经冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。
2.根据权利要求1所述的海胆棘壳色素的制备方法,其特征在于在操作步骤(三)海胆棘壳色素的提取与纯化中的(1)中所得到的膏状母液用大孔树脂进行提取海胆棘壳色素粗品,吸附洗脱条件及步骤为:(1)大孔树脂装柱径高比为1∶5~1∶20,膏状色素母液用浓度为0.2%(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后进行吸附,吸附温度为10~60℃,树脂吸附溶液的pH为1~
5,吸附流速1~20BV/h;
所述大孔树脂为NKA-9、NKA-II、D101或D4020型号树脂; (2)用1~3倍柱床体积的纯水或含有1~30%(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱,此洗脱液弃去,以除去无机盐、糖、蛋白杂质;
(3)用含有0~5%(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30%~100%(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱2~5个柱床体积,洗脱流速1~20BV/h,收集洗脱部分,10~
60℃减压浓缩至无乙醇味后经冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。
3.根据权利要求1所述的海胆棘壳色素的制备方法,其特征在于在操作步骤(三)海胆棘壳色素的提取与纯化中的(2)中所得到的紫红色海胆棘壳色素粗品粉末用大孔树脂进行再次提纯,吸附洗脱条件及步骤为:(1)大孔树脂装柱径高比为1∶5~1∶20,海胆棘壳色素粗品粉末用0.2%(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后吸附,吸附温度为10~60℃,树脂吸附溶液的pH为1~5,吸附流速1~20BV/h;
所述大孔树脂为NKA-9、NKA-II、D101或D4020型号树脂;
(2)用1~3倍柱床体积的纯水或含有1~30%(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱,以除去无机盐、糖、蛋白杂质;
(3)用含有0~5%(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30~100%(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱2~5个柱床体积,洗脱流速1~20BV/h,收集洗脱部分,10~
60℃减压浓缩至无乙醇味后冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素纯品粉末。
4.根据权利要求1、2或3所述的海胆棘壳色素的制备方法,其特征在于精制海胆棘壳色素,其操作步骤为:将海胆棘壳色素粉末用甲醇溶解至饱和后上C18或C8反相柱分离纯化,用含有0~
5%(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的5~100%(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱,分别收集不同海胆棘壳色素所在洗脱峰的洗脱液,经浓缩结晶即得海胆棘壳色素纯品,其纯度>95%。