1.一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）胞内代谢物处理：

①细胞收集与淬灭

取不同发酵时期的弗氏链霉菌发酵液，离心以除去培养基中大部分固体杂质，细胞沉淀经冲洗后加入溶液淬灭剂，快速混合涡旋、均质，置于低温条件下孵育，真空抽滤快速过滤，收集固体样品；

②代谢物提取

将处理后的固体样品置于离心管中，加入代谢物提取液及内标，涡旋均匀后，置于冰块中超声提取胞内代谢物，超声结束后离心，离心后得到的沉淀加入相同体积的提取液置于冰块上再次超声进行二次提取，超声结束后离心，合并两次上清液，离心后取上清过膜至进样小瓶进行液相色谱‑质谱联用方法测定；

2）液相色谱‑质谱联用方法测定；

3）数据处理及分析：

通过步骤2）测试得到的数据导入代谢组学处理软件进行基线过滤、峰识别、积分、保留时间校正、峰对齐和归一化处理，得到含保留时间、质荷比和峰强度信息的数据矩阵；其后进行特征峰搜库鉴定，将MS和MS/MS质谱信息与Metlin、KEGG、PubChem数据库进行匹配，MS质量误差设置为小于10 ppm，同时根据二级质谱匹配得分鉴定代谢物；使用方差分析对不同组的样本代谢物进行统计学分析，包括非监督模式下的主成分分析和监督模式下的 PLS‑DA 分析，筛选出 VIP＞1，具有显著性差异p<0.05且化合物响应值差异变化大于 2 倍的化合物，即为组间的差异性代谢物；通过KEGG数据库对筛选出的差异代谢物进行代谢通路富集和整体变化分析；

步骤2）中的液相色谱‑质谱联用方法测定的操作条件如下：液相参数：色谱柱：ACQUITY BEH C18柱，2.1 mm×100 mm，1.7 μm；柱温：35 ℃；流速：0.2 mL/min；进样体积：2 μL；流动相A：0.1%甲酸水；流动相B：乙腈；梯度洗脱的程序如下：0‑20min，流动相A的体积分数由

95％减少至75%，流动相B的体积分数由5%增加至25％；20‑25min，流动相A的体积分数由75%减少至10%，流动相B的体积分数由25%增加至90%；25‑26min，流动相A的体积分数由10%增加至95%，流动相B的体积分数由90%减少到5%，26‑30min，流动相A体积分数为95%，流动相B体积分数为5%；

质谱参数：质谱在正离子转换模式下进行全扫描测定，质量范围：m/z 50～1500；毛细管电压：3000 V；干燥气流速：8 L/min；碎裂电压：160 V；干燥气温度：325 ℃；鞘气温度：

325 ℃；鞘气流速：11 L/min；雾化气压力：40 psi。

2.如权利要求1所述的一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法，其特征在于，步骤1）的中细胞收集与淬灭的具体方法为：取不同发酵时期的弗氏链霉菌发酵液，

10000 14000 rpm 4 ℃离心5 min，以除去培养基中大部分固体杂质；弃上清，细胞沉淀用~PBS缓冲液清洗两次，然后用去离子超纯水清洗一遍，加入‑80 ℃预冷24 h的60%甲醇溶液淬灭剂，涡旋1 min，然后置于0 5 ℃下孵育5 min，再通过真空抽滤快速过滤混合液，收集~固体样品。

3.如权利要求2所述的一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法，其特征在于，每1 mol/L所述PBS缓冲液中含有NaCl 8.00 g、KCl 0.20 g、Na2HPO4 1.42 g和KH2PO4 

0.27 g。

4.如权利要求1所述的一种弗氏链霉菌不同发酵时期差异代谢物的分析方法，其特征在于，步骤1）中的代谢物提取的具体方法为将处理后的固体样品置于离心管中，加入‑80 ℃预冷24 h的体积比为1:1的甲醇与水的混合提取液及0.02 mg/mL内标L‑2‑氯苯丙氨酸，涡旋1 min混合均匀后，置于冰块中超声20 40 min提取胞内代谢物；超声结束后8000~ ~

12000 rpm 0 5 ℃离心5 20 min，沉淀加入提取液再次置于冰块中超声15 45 min进行二~ ~ ~次提取，超声结束后8000 12000 rpm 0 5 ℃离心5 15 min，合并两次上清，涡旋1 min混合~ ~ ~均匀后8000 12000 rpm 4 ℃离心1 10 min，取上清，取上清，用0.22 μm膜过滤至进样小~ ~瓶，进行液相色谱‑质谱联用方法测定。