1.一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:包括以下步骤:在0 30℃下,往GLP‑1类似物发酵液中添加无机盐和亲水性有机溶剂,混悬均匀,调节~pH为8.5 10.5,离心使体系分相,取上相通过肠激酶酶切后采用反向制备液相色谱法进行~纯化处理;其中:
以体系的总质量计,无机盐的添加量为10% 35%,亲水性有机溶剂的添加量为15% 40%;
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无机盐选自柠檬酸钠、硫酸铵、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、磷酸钠中的一种或多种;
亲水性有机溶剂选自乙醇、叔丁醇、正丙醇、异丙醇中的一种或多种;
GLP‑1类似物发酵液的蛋白浓度为9 13mg/mL。
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2.如权利要求1所述的一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:无机盐为磷酸氢二钾。
3.如权利要求1所述的一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:亲水性有机溶剂为乙醇。
4.如权利要求1所述的一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:以体系的总质量计,无机盐的添加量为13% 24%。
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5.如权利要求4所述的一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:以体系的总质量计,无机盐的添加量为13% 17%。
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6.如权利要求1所述的一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:以体系的总质量计,亲水性有机溶剂的添加量为16% 26%。
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7.如权利要求1所述的一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:调节pH为9.5。
8.如权利要求1所述的一种双水相萃取耦合反相柱层析分离纯化发酵液中GLP‑1类似物的方法,其特征在于:所述纯化处理的方法为:将肠激酶酶切得到的GLP‑1类似物粗产物溶解于Tris缓冲液后,上样于反向制备液相色谱柱,收集21min出峰位置的峰产物,其中:反向制备液相色谱分离的流动相为:A(含0.1%(体积分数)TFA的水)、B(0.1%TFA(体积分数)的乙腈);样品上样溶液为10%(体积分数)乙腈溶液;色谱柱为 Sepax Bio‑C8(10μm,21.2*
250mm);洗脱条件为:0‑5 min,5%B;5‑5.5min,5‑30%B;5.5‑30 min,30%‑80%B;30‑30.5min,
80‑100%B;30.5‑35min,100%B;35‑35.5min,100‑5%B;35.5‑40 min,5% B;然后下一批循环。