1.一种提高NK细胞杀伤活性的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)分离获得外周血单个核细胞;
(2)采用包被液对培养瓶进行包被,将包被后的培养瓶作为诱导培养瓶,取步骤(1)中外周血单个核细胞用诱导培养基重悬,接种于诱导培养瓶中诱导培养2‑3d,得到细胞培养液;
所述诱导培养基的成分为:AIM‑V培养基、大米低聚肽3.5‑10μg/mL、二十二碳六烯酸1‑
5μg/mL、IL‑15 80‑100ng/mL、IL‑12 200‑300IU/mL;所述包被液由AIM‑V培养基和添加在其中的抗CD3抗体制成,抗CD3抗体在包被液中的浓度为0.5‑5μg/mL;
(3)向步骤(2)的细胞培养液中加入扩增培养基继续培养8‑10d,每2‑3天补充一次扩增6
培养基,使细胞密度保持在1‑3×10个/mL,得到NK细胞;
所述扩增培养基的组成为:DMEM培养基、吡嗪甲酰胺10‑20ng/mL、灯盏花素1‑5μg/mL、谷氨酰胺5‑15μg/mL、IL‑2 800‑1000IU/mL、IL‑21 90‑120IU/mL。
2.根据权利要求1所述提高NK细胞杀伤活性的培养方法,其特征在于,步骤(2)中,所述大米低聚肽为大米蛋白粉经酶解、过滤后得到。
3.根据权利要求1所述提高NK细胞杀伤活性的培养方法,其特征在于,步骤(1)中,所述外周血单个核细胞的具体制备方法为:无菌条件下采集人体外周血,用PBS缓冲液稀释外周血,采用葡聚糖‑泛影葡胺密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞。
4.根据权利要求1所述提高NK细胞杀伤活性的培养方法,其特征在于,步骤(2)中,所述6
外周血单个核细胞的接种密度为1‑5×10个/mL。
5.根据权利要求1所述提高NK细胞杀伤活性的培养方法,其特征在于,所述诱导培养和扩增培养均在37℃,5%CO2的条件下进行。