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专利号: 2024110673764
申请人: 清泽医疗科技(广东)有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:授权未缴费
更新日期:2024-12-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取待冻存的间充质干细胞重悬于添加冻存保护剂的培养基中,培养15‑20 h后进行程序降温,完成后保存于液氮中;所述冻存保护剂为:枇杷叶提取物、银耳多糖和白藜芦醇;

(2)将液氮中保存的细胞取出,在37‑40℃水浴融化,然后离心去除细胞悬液,加入添加复苏保护剂的培养基,离心后再次用添加复苏保护剂的培养基重悬,培养20‑24 h后完成细胞复苏;所述复苏保护剂为:马钱苷、羧甲基纤维素钠和表皮生长因子。

2. 根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,所述培养基为DMEM/F12培养基,所述冻存保护剂在培养基中的浓度为:枇杷叶提取物2.5‑5.0 μg/mL、银耳多糖10‑20 ng/mL、白藜芦醇1‑5 μM;所述复苏保护剂在培养基中的浓度为:马钱苷15‑25 ng/mL、羧甲基纤维素钠10‑20 μg/mL、表皮生长因子25‑35 ng/mL。

3.根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,步骤(1)中间充

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质干细胞在培养基中的密度为1×10‑5×10个/mL。

4.根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,步骤(2)中间充

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质干细胞在培养基中的密度为1×10‑5×10个/mL。

5. 根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,步骤(1)和步骤(2)中均在37℃,5% CO2的条件下进行培养。

6. 根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,所述枇杷叶提取物的制备过程如下:取枇杷叶粉碎后,加入5‑10倍重量的70‑80%乙醇溶液浸泡2‑3 h,在

60‑70℃下提取1‑3次,每次提取1‑2 h,过滤后收集滤液,将滤液减压浓缩、真空干燥后得到枇杷叶提取物。

7.根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞。

8. 根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法,其特征在于,步骤(1)中程序降温的过程为:4℃等待2‑3 min;以1‑2℃/min的速度降温至‑15℃;以15‑20℃/min的速度降温至‑50℃;以10℃/min的速度降温至‑80℃。