1.基于蛇足石杉转录组序列开发的EST‑SSR标记引物,其特征在于,包括Hup_09、Hup_
13、Hup_14、Hup_23、Hup_27、Hup_28、Hup_33、Hup_44、Hup_45、Hup_48、Hup_53、Hup_54、Hup_
56、Hup_73、Hup_76、Hup_82、Hup_87、Hup_88、Hup_90、Hup_91和Hup_93共21对引物;
Hup_09序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示;
Hup_13序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示;
Hup_14序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示;
Hup_23序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示;
Hup_27序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示;
Hup_28序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示;
Hup_33序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示;
Hup_44序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示;
Hup_45序列如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示;
Hup_48序列如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示;
Hup_53序列如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示;
Hup_54序列如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示;
Hup_56序列如SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示;
Hup_73序列如SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示;
Hup_76序列如SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示;
Hup_82序列如SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32所示;
Hup_87序列如SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34所示;
Hup_88序列如SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36所示;
Hup_90序列如SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38所示;
Hup_91序列如SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40所示;
Hup_93序列如SEQ ID NO.41和SEQ ID NO.42所示。
2.含有权利要求1所述的基于蛇足石杉转录组序列开发的EST‑SSR标记引物的试剂盒。
3.如权利要求1所述的EST‑SSR标记引物在构建蛇足石杉遗传图谱、蛇足石杉种质鉴定、蛇足石杉育种、在蛇足石杉遗传多样性分析、蛇足石杉亲缘关系分析、蛇足石杉分子标记辅助育种、石杉属亲缘关系分析或石杉属遗传多样性分析中的应用。
4.如权利要求2所述的试剂盒在构建蛇足石杉遗传图谱、蛇足石杉种质鉴定、蛇足石杉育种、在蛇足石杉遗传多样性分析、蛇足石杉亲缘关系分析、蛇足石杉分子标记辅助育种、石杉属亲缘关系分析或石杉属遗传多样性分析中的应用。
5.如权利要求1所述的EST‑SSR标记引物的应用方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)提取石杉基因组DNA;
2)使用所述引物对进行PCR扩增,得到PCR产物;
3)将步骤2)得到的PCR产物进行丙烯酰胺凝胶电泳;
4)对步骤3)的电泳条带进行分析。
6.如权利要求5所述的EST‑SSR标记引物的应用方法,其特征在于,所述步骤2)中 PCR 扩增体系:ddH2O 7 μL,2×Taq PCR Master Mix 10 μL,浓度为30 ng/μL模板 DNA 1 μL,浓度为10 μmol/L的上下游引物各1 μL。
7.如权利要求5所述的EST‑SSR标记引物的应用方法,其特征在于,所述步骤2)中PCR 扩增程序为 :94 ℃预变性 5 min,94 ℃变性 30 sec,60 ℃退火 30 sec,72 ℃延伸 1 min,进行 35 个循环,最后 72 ℃延伸 10 min,然后在 4 ℃保存至取出。