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专利号: 2024108089708
申请人: 信天翁生物科技(广州)有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:授权未缴费
更新日期:2025-08-30
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种细胞凋亡检测试剂盒,其特征在于,包括以下体积原料:2‑3μL膜联蛋白V、0.5‑

1.5mL结合液、0.5‑1.5mL封闭液、2‑3μL活性染料Ⅰ、4‑6μL活性染料Ⅱ,所述结合液由质量体积比g/mL为(0.6‑1.0):(0.05‑0.1):(0.8‑1.2):(96‑98)的甾体皂甙、钙离子溶液、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、水组成。

2.如权利要求1所述的一种细胞凋亡检测试剂盒,其特征在于,所述活性染料Ⅰ为异硫氰酸荧光素,所述活性染料Ⅱ为碘化丙啶或7‑氨基放线菌素D。

3.如权利要求1或2所述的一种细胞凋亡检测试剂盒,其特征在于,所述活性染料1浓度为3μg/mL‑5μg/mL,所述活性染料2浓度为1μg/mL‑3μg/mL。

4.如权利要求1所述的一种细胞凋亡检测试剂盒,其特征在于,所述结合液中的钙离子溶液选自氯化钙溶液、氢氧化钠钙溶液、葡萄糖酸钙溶液、柠檬酸钙溶液、硫酸钙溶液其中的一种。

5.如权利要求1或4所述的一种细胞凋亡检测试剂盒,其特征在于,所述结合液pH为

7.0‑8.0。

6.如权利要求1所述的一种细胞凋亡检测试剂盒,其特征在于,所述封闭液由质量体积比g/mL为(0.6‑0.8):(6‑8):(6‑10)的鱼精蛋白、氯化钠溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液组成。

7.如权利要求1所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

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S1、细胞样品收集与洗涤:取1×10‑3×10个细胞置入试管中,用1.0‑1.5mL温度为2‑8℃的磷酸盐缓冲液洗涤两次,离心分离,弃去上清液,得到细胞样品沉淀;

S2、细胞准备:向所述细胞样品沉淀中加入0.5‑1.5mL温度为2‑8℃的结合液重悬,得到

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细胞悬浮液,并调整细胞数为1×10‑3×10个/ml,备用;

S3、膜联蛋白V标记:将2‑3μL膜联蛋白V与2‑3μL活性染料Ⅰ混合,轻柔涡旋混匀,避光孵育,形成膜联蛋白V‑异硫氰酸荧光素标记复合物;

S4、细胞染色与结合:取100μL细胞悬浮液并向细胞悬浮液中加入4‑6μL膜联蛋白V‑异硫氰酸荧光素标记复合物,轻柔涡旋混匀,避光孵育;

S5、封闭与染色:向S4孵育后的细胞悬浮液中加入0.5‑1.5mL封闭液,并加入4‑6μL活性染料Ⅱ染色,轻柔涡旋混匀,避光孵育,得到双色标记细胞样品;

S6、流式细胞仪参数设置及检测:采用流式细胞仪对双色标记细胞样品进行检测,设置流式细胞仪的通道、激发波长,收集待测试样的绿色和红色荧光信号。

8.如权利要求7所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,所述S1中离心分离转速为800‑1200r/min,离心分离时间为5‑10min。

9.如权利要求7所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,所述S3、S4、S5中孵育时间为4‑6min、孵育温度为20‑25℃,所述S3、S4、S5中涡旋转速为600‑800r/min、涡旋时间为5‑10s。

10.如权利要求7所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,所述S6中设置流式细胞仪的通道为绿色荧光通道及红色荧光通道,绿色荧光通道激发波长为488nm,收集波长为500‑550nm的绿色荧光信号,红色荧光通道激发波长为530‑550nm,收集波长为

600‑670nm的红色荧光信号。