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专利号: 2024105679328
申请人: 永州中古生物技术有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种在NCI‑H460细胞系中对CK2起到抑制作用的多肽,其特征在于,所述抑制多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;

在所述多肽的N末端的Pro进行磷酸酯修饰,且C末端的Arg结构中的羧基中的羟基被甲基所取代。

2.一种在NCI‑H460细胞系中对CK2起到抑制作用的多肽的制备方法,用于制备如权利要求1所述的在NCI‑H460细胞系中对CK2起到抑制作用的多肽,其特征在于,包括以下步骤:S1.将Fmoc‑Wang amide‑MBHA Resin树脂预处理后脱除Fmoc保护基;

S2.将Fmoc‑Cys(R1)‑OH偶联于脱保护后的树脂以及末端Arg羧基羟基的甲基化;

S3.从C‑端到N‑端重复上述S1‑S2以连接上相应的氨基酸,得到多肽‑树脂复合物;

S4.N端Pro磷酸酯衍生物的制备以及与多肽‑树脂复合物的偶联;

S5.将固相合成得到的多肽‑树脂复合物裂解,释放出合成的抑制多肽。

3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述S1的具体步骤包括:

(1)树脂预处理:使用DCM和NMP对Fmoc‑Wang amide‑MBHA Resin树脂进行溶胀;

(2)Fmoc脱保护:将溶胀后的树脂与含0.2M 6‑Cl‑HOBT的哌啶/NMP溶液混合,于50‑60℃恒温水浴中搅拌15‑30min,冷却后过滤除去溶液,再与新的含0.2M 6‑Cl‑HOBT的哌啶/NMP溶液混合,置于恒温水浴中,50‑60℃下搅拌20‑40min,冷却后得到脱去初始Fmoc保护基的树脂。

4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述S2的具体步骤为:

(1)使用含Fmoc‑Cys(R1)‑OH、HBTU、HOBT和DIPEA的NMP混合溶液作为促进液,与脱去Fmoc保护基的树脂混合,进行第三次水浴反应,冷却后过滤除去反应液,清洗后得到含Fmoc‑Cys(R1)残基的树脂;

(2)将树脂与CH3I按照摩尔比为1:(5‑10)的比例混合,然后加入C6H15N混合,然后将混合物置于惰性气体中,0‑4℃下反应12‑24h,反应完成后依次使用适量的DMF、DCM和甲醇洗涤树脂清洗树脂,去除未反应试剂。

5.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述S4的具体步骤为:

(1)在无水无氧条件下,取Fmoc‑Pro‑OH,加入DCC和C2H7O4P,然后在室温、氮气保护下充分搅拌反应体系,生成Fmoc‑Pro‑PO(OEt)2;

(2)将Fmoc‑Pro‑PO(OEt)2纯化,并使用已纯化的Fmoc‑Pro‑PO(OEt)2作为N端氨基酸单元,以HBTU/HOBT/DIPEA作为偶联试剂,将其与已制备的多肽‑树脂复合物进行酰胺键偶联反应,使Fmoc‑Pro‑PO(OEt)2与复合物上C端残基形成酰胺键。

6.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述S5的具体步骤为:

将完成偶联的多肽‑树脂复合物与裂解剂Reagent K混合,在0℃下振摇30min,随后继续反应3h,抽滤后将滤液与C4H8O2混合,收集沉淀得到抑制多肽的粗品。

7.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在S5得到所述抑制多肽的粗品后,还包括液相色谱纯化,色谱条件包括:C18反相柱;流动相A:体积百分浓度为0.10%甲酸水溶液和甲醇;流动相B:体积百分浓度为0.1%的TFA/乙腈;流动相梯度:流动相B20‑80%,30min;

流速为500mL/min检测波长为220nm,分段收集主峰,合并任意单一杂质不大于0.5%的分段纯化液,不合格段合并浓缩后重复纯化至纯化液合格。

8.如权利要求2所述的制备方法制备得到的对CK2起到抑制作用的多肽在制备抗肿瘤药物中的应用,其特征在于,肿瘤选自大细胞癌。

9.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物的有效成分包括权利要求2‑8任一项所述制备方法制备得到的抑制多肽或抑制多肽的盐以及药学上可接受的载体。