1.一种药物筛选用纳米荧光传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、将酒石酸、2,6‑二甲基‑3,5‑二乙酯基‑1,4‑二氢吡啶和3‑氨基苯硫酚加入乙醇水溶液中,超声分散,得到前驱液;其中,乙醇水溶液是由乙醇和超纯水混合得到;
S2、将前驱液转移至反应釜中,加热下进行水热反应,反应结束后冷却,将产物离心,离心液用滤膜过滤,得到的滤液用透析袋透析,收集透析袋内的透析液,冷冻干燥,得到氮硫掺杂的碳点:N,S‑CDs;
S3、将N,S‑CDs加入超纯水中,超声分散,配制得到碳点分散液;
S4、取碳点分散液和铁离子溶液混合,搅拌,静置,离心,固体产物用去离子水洗涤,真空干燥,得到药物筛选用纳米荧光传感器;
该药物筛选用纳米荧光传感通过检测乳酸脱氢酶活性标志物NAD+的浓度来判断待检测药物对乳酸脱氢酶活性的抑制效果,从而实现待检测药物抗癌药效的筛选。
2.根据权利要求1所述的药物筛选用纳米荧光传感器的制备方法,其特征在于,步骤S1具体为:将150‑600mg的酒石酸、125‑506mg的2,6‑二甲基‑3,5‑二乙酯基‑1,4‑二氢吡啶和31‑
126mg的3‑氨基苯硫酚加入150‑600mL乙醇水溶液中,40‑60℃下超声分散15‑60min,得到前驱液;
其中,乙醇水溶液是由乙醇和超纯水混合得到,且乙醇:超纯水的体积比为1:2‑3:1。
3.根据权利要求2所述的药物筛选用纳米荧光传感器的制备方法,其特征在于,步骤S2具体为:将前驱液转移至聚四氟乙烯内衬的反应釜中,170‑200℃下反应4‑16h,反应结束后冷却,将产物在3000‑5000rpm下离心2‑10min,离心液先用0.2‑0.3μm的滤膜过滤,得到的滤液用截留分子量为1000‑1500Da的透析袋透析12‑48h,收集透析袋内的透析液,冷冻干燥,得到氮硫掺杂的碳点:N,S‑CDs。
4.根据权利要求3所述的药物筛选用纳米荧光传感器的制备方法,其特征在于,步骤S3具体为:将N,S‑CDs加入超纯水中,超声分散5‑30min,配制得到浓度为0.5‑2mg/mL的碳点分散液。
5.根据权利要求4所述的药物筛选用纳米荧光传感器的制备方法,其特征在于,步骤S4具体为:取10‑40mL碳点分散液和0.5‑2mL浓度为2.5‑10mg/mL的Fe2(SO4)3水溶液混合,搅拌15‑60min,静置1‑4h,500‑2000rpm下离心2‑10min,固体产物用去离子水洗涤,60‑80℃下真空干燥,得到药物筛选用纳米荧光传感器。
6.根据权利要求5所述的药物筛选用纳米荧光传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、将300mg的酒石酸、253mg的2,6‑二甲基‑3,5‑二乙酯基‑1,4‑二氢吡啶和62mg的3‑氨基苯硫酚加入300mL乙醇水溶液中,50℃下超声分散30min,得到前驱液;
其中,乙醇水溶液是由乙醇和超纯水混合得到,且乙醇:超纯水的体积比为3:2;
S2、将前驱液转移至聚四氟乙烯内衬的反应釜中,190℃下反应8h,反应结束后冷却,将产物在4000rpm下离心5min,离心液先用0.22μm的滤膜过滤,得到的滤液用截留分子量为
1200Da的透析袋透析24h,收集透析袋内的透析液,冷冻干燥,得到氮硫掺杂的碳点:N,S‑CDs;
S3、将N,S‑CDs加入超纯水中,超声分散10min,配制得到浓度为1mg/mL的碳点分散液;
S4、取20mL碳点分散液和1mL浓度为5mg/mL的Fe2(SO4)3水溶液混合,搅拌30min,静置
2h,1000rpm下离心5min,固体产物用去离子水洗涤,70℃下真空干燥,得到药物筛选用纳米荧光传感器。
7.一种药物筛选用纳米荧光传感器,其特征在于,其通过如权利要求1‑6中任意一项所述的方法制备得到。
8.一种药物筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、将权利要求7所述的纳米荧光传感器加入去离子水中,超声分散5‑30min,制备成纳米荧光传感器分散液;向培养液中加入纳米荧光传感器分散液,搅拌均匀,制备得到纳米荧光传感的浓度为0.1‑2mg/mL的检测液;
步骤二、向检测液中加入待测药物,控制待测药物的浓度为0.5‑20μg/mL,用所得到的检测液培育癌细胞,37℃下培育1‑12h;
步骤三、培育结束后,用去离子水冲洗癌细胞,离心,弃离心液,然后将癌细胞置于
320nm的激发光下,检测464nm和585nm处的荧光强度,依次记为F464、F585,计算比值K,K=F464/F585,然后根据预先建立的表征K的值与NAD+浓度关系的标准曲线,分析得到癌细胞中的NAD+浓度,最后根据NAD+的浓度判断待测药物抑制乳酸脱氢酶活性的药效;
其中,K的值越小,表明NAD+浓度越低,说明待测药物抑制乳酸脱氢酶活性的药效越好。
9.根据权利要求8所述的药物筛选方法,其特征在于,其中,所述标准曲线通过以下方法构建得到:
1)将权利要求7所述的纳米荧光传感器加入去离子水中,超声分散5‑30min,制备成浓度为0.1‑2mg/mL的纳米荧光传感器分散液;
2)向纳米荧光传感器分散液中加入不同量的NAD+,搅拌均匀,制备得到含有相同纳米荧光传感器浓度、不同NAD+浓度的一系列的标准工作液,该一系列标准工作液中NAD+浓度范围为0‑5μmol/L;
3)将标准工作液在37℃下静置1‑12h后离心,弃离心液,所得固体加入去离子水中制备成分散液后置于320nm的激发光下,检测464nm和585nm处的荧光强度,依次记为FB464、FB585,计算比值KB,KB=FB464/FB585,以KB为横坐标、NAD+的浓度为纵坐标,进行曲线拟合,得到所述标准曲线。
10.根据权利要求8所述的药物筛选方法,其特征在于,步骤三中,预先将不同的NAD+浓度Cx对应划分为不同的药效等级:无效、药效差、药效中等、药效优,然后根据检测得到NAD+的浓度,判断得到待测药物抑制乳酸脱氢酶活性的药效等级;
其中,Cx≥C1时,对应药效等为无效;C2≤Cx<C1时,对应药效等为药效差;C3≤Cx<C2时,对应药效等为药效中等;Cx<C3时,对应药效等为药效优;
其中,C3<C2<C1。