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专利号: 2023118473831
申请人: 南京晓庄学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)匀浆:分别取牛咬肌和牛躯干皮肌绞碎后,加入液体A1,使用组织捣碎仪6000‑

7000r/min,搅打30‑40s,挑出肉眼可见的不溶物质,再次使用组织捣碎仪6000‑7000r/min,搅打30‑40s,离心并收集沉淀,将沉淀物重新分散在液体A1中,匀浆,离心,收集沉淀,用液体A2和液体A3分别代替液体A1重复上述匀浆步骤各一次,收集沉淀;所述液体A1为20mmol/L K2HPO4/KH2PO4、0.1mol/L NaCl、2mmol/L MgCl2、1mmol/L EGTA,pH 7.0,所述液体A2为

20mmol/L K2HPO4/KH2PO4、0.1mol/L NaCl,pH 6.25,液体A3为20mmol/L K2HPO4/KH2PO4,pH 

6.0;

(2)粗提:所得沉淀再次分散在溶液B中抽提后离心,所得上清液用水稀释后静置,离心,往沉淀中重新加入0.1mol/L KCl溶液溶解后离心取沉淀;所述溶液B为0.675mol/L KCl、7.5mmol/L MgCl2、0.15mmol/L DTT、7.5mmol/L ATP,pH 6.4;

(3)硫酸铵沉淀:所得沉淀用溶液C溶解,再加入溶液D,边搅拌边滴加饱和硫酸铵溶液至饱和度达到37%,搅拌后离心,精确量取上清液的体积,边搅拌边滴加饱和硫酸铵至饱和度达到48%,搅拌后离心;所述溶液C为3mol/L KCl、0.6mmol/L DTT、0.12mol/L Tris‑maleate,pH 7.5,所述溶液D为110mmol/L ATP、55mmol/L MgCl2、5.5mmol/L EGTA,pH 7.5;

(4)透析:溶解沉淀并透析过夜,然后离心取上清。

2.根据权利要求1所述的Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,步骤(1)中沉淀物重新分散在5~6倍液体A1中。

3.根据权利要求1所述的Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,步骤(2)中溶液B的加入量为牛咬肌或牛躯干皮肌的2~3倍体积。

4.根据权利要求1所述的Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,步骤(2)所得上清液用8~10倍水稀释后静置2~4h。

5.根据权利要求1所述的Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,步骤(2)沉淀中重新加入0.1~0.2mol/L KCl溶解后离心取沉淀。

6.根据权利要求1所述的Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,步骤(3)溶液C的加入量为牛咬肌的3~4倍或牛躯干皮肌的2~3倍体积。

7.根据权利要求1所述的Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,步骤(3)溶液D的加入量为牛咬肌2~3倍或牛躯干皮肌1~2倍体积。

8.根据权利要求1所述的Ⅰ/Ⅱ型肌球蛋白亚型的提取纯化方法,其特征在于,步骤(4)中透析液为0.5mol/L NaCl、0.1mmol/L DTT、20mmol/L Tris‑maleate,pH 7.5。