利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2023110660238
申请人: 深圳市华健生物技术有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-07-05
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种提高植物外泌体稳定性的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)采用聚合物沉淀法制备植物外泌体粗溶液;

(2)对所述植物外泌体粗溶液依次进行脂肪酸修饰和聚乙二醇修饰,得到植物外泌体交联体系;

所述脂肪酸修饰的方法为将脂肪酸羧酸与所述植物外泌体粗溶液、PBS溶液混合,得到脂肪酸修饰的植物外泌体;所述脂肪酸羧酸的浓度为0.1 10 mM;所述植物外泌体粗溶液与~所述脂肪酸羧酸体积比为(8 12):1;所述PBS溶液的添加量为所述植物外泌体粗溶液和所~述脂肪酸羧酸总体积的0.5 2倍;所述混合的温度为20 25℃,时间为6 12h;

~ ~ ~

所述聚乙二醇修饰的方法为将聚乙二醇‑800与所述脂肪酸修饰的植物外泌体混合,使聚乙二醇‑800的终浓度为1.3 2.5%,得到植物外泌体交联体系;所述聚乙二醇‑800的原始~浓度为30 50%,所述混合的温度为20 25℃,时间为1 3h;

~ ~ ~

(3)向所述植物外泌体交联体系中加入海藻糖溶液,混合,离心,重悬,得到高稳定性的植物外泌体;

所述海藻糖溶液的原始浓度为20 30%,所述海藻糖溶液添加至终浓度为10 15%;所述~ ~离心的温度为2 6℃,转速为120000 150000g,时间为0.5 1.5h,次数为1 3次。

~ ~ ~ ~

2.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)所述植物外泌体粗溶液的制备方法,包括如下步骤:a.向植物组织中加入PBS溶液,经破碎,得到植物提取汁;

b.将所述植物提取汁以800 1200g离心10 20min,取上清液;

~ ~

c.将步骤b所得上清液以4000 6000g离心25 40min,取上清液;

~ ~

d.将步骤c所得上清液与聚乙二醇‑800混合,使聚乙二醇‑800的终浓度为5 15%,离心,~取沉淀物;

e.将所述沉淀物溶于PBS溶液,并加入聚乙二醇‑800,使聚乙二醇‑800的终浓度为2~

5%,混合均匀后,离心,重悬,得到所述植物外泌体粗溶液。

3.根据权利要求2所述的提取方法,其特征在于,步骤a中,所述植物组织与所述PBS溶液的体积比为(0.5 2):(0.5 2)。

~ ~

4.根据权利要求3所述的提取方法,其特征在于,步骤d中,所述聚乙二醇‑800的原始浓度为50 60%;所述混合的温度为0 4℃,所述混合的时间为12 16h。

~ ~ ~

5.根据权利要求4所述的提取方法,其特征在于,步骤e中,所述PBS溶液的体积为2~

8mL;所述聚乙二醇‑800的原始浓度为50 60%;所述重悬的溶剂为无颗粒PBS缓冲液,所述无~颗粒PBS缓冲液的体积为50 500μL。

~

6.根据权利要求5所述的提取方法,其特征在于,所述重悬的溶剂为浓度为20 30%的海~藻糖溶液,所述高稳定性的植物外泌体的浓度为(0.5 1)mg/mL。

~