1.一种含不饱和低聚半乳糖醛酸肠道菌群调节剂在制备调节肠道菌群结构的产品中的应用,其特征在于:所述肠道菌群调节剂的有效成分包括不饱和低聚半乳糖醛酸,不饱和低聚半乳糖醛酸通过促进益生菌的增值,降低有害菌的数量,改善肠道菌群的结构组成;
不饱和低聚半乳糖醛酸为柠檬不饱和低聚半乳糖醛酸,分子量80‑85 kDa,不饱和度为
7‑10,制备方法包括以下步骤:
1)果胶酶解液的制备:用pH为3.5‑4.5的柠檬酸‑磷酸二氢钠缓冲溶液将柠檬果胶配制成浓度为0.5‑2%的果胶溶液,加入果胶裂解酶,于 35‑55 ℃条件下反应4‑8h,煮沸灭酶活,离心,收集上清液即为果胶酶解液;
2)活性炭脱色:调节果胶酶解液pH为3.0‑4.0,加入活性炭,于55‑65℃下脱色10‑
40min,离心,收集上清液;
3)酵母发酵除单糖:取上清液加入酵母,酵母加入量以上清液体积计为8‑12 g/L,在
25‑40 ℃下发酵12‑24 h,离心,收集上清液即获得发酵液,旋蒸浓缩至原体积的20‑30%,获得浓缩液;
4)超滤:将浓缩液通过微滤装置过滤除去其中含有的杂质,然后通过8‑12kDa的聚醚砜膜除掉大分子量多糖,取截留液经过冷冻干燥,即得不饱和低聚半乳糖醛酸;
步骤1)中所述果胶裂解酶是重组毕赤酵母经培养、发酵、纯化而成的纯酶液,纯酶液酶活是2‑3U/mL,其加入体积是步骤1)果胶溶液体积的2‑4%。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述果胶裂解酶的制备方法包括:按如下方法制备:(1)将重组毕赤酵母接种至BMGY液体培养基中,于室温摇床培养16‑18h至OD600=2‑
4;无菌条件下4000rpm离心5min,菌体转接于BMMY液体培养基,每隔12h向培养基中无菌注射甲醇至体积终浓度为1%,室温、200rpm摇床发酵培养72h,12000rpm离心5min,上清液,即为粗酶液;(2)Ni‑NTA亲和层析柱用含有20mM咪唑的pH7.2 PB缓冲液平衡后,将粗酶液以流速2mL/min上样,上样结束后再用含有20mM咪唑的pH7.2 PB缓冲液洗平基线,最后用含
200mM咪唑的pH7.2 PB缓冲液以流速2mL/min洗脱目的蛋白,当UV280nm值大于200mAU时收集洗脱液,当UV280nm值下降到小于200mAU停止收集,获得纯酶液即为果胶裂解酶。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于步骤1)中所述柠檬果胶的制备方法包括以下步骤:S1原料处理:将新鲜柠檬全果经过榨汁加工后压榨得到的果皮,用45‑55 ℃水洗涤,充分洗去黄酮类、多酚类物质,然后用水煮沸5‑10 min,过滤、烘干,获得柠檬渣;
S2柠檬果胶的提取:将柠檬渣溶于10‑20倍质量的水中,调pH值为1.0‑2.0,75‑85℃水浴提取0.2‑1 h,抽滤,取滤液,得到果胶提取液;
S3醇沉:向果胶提取液中加入体积浓度95%乙醇水溶液至乙醇体积浓度为50‑55%,室温放置0.5‑2 h,过滤得到沉淀,重复提取醇沉2‑4次,收集沉淀后烘干,获得柠檬果胶。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于:所述的益生菌包括双歧杆菌
Bifidobacterium和乳酸杆菌Lactobacillus,所述的有害菌包括埃希氏志贺菌Escherichia‑Shigella和拟杆菌Bacteroides。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于:所述不饱和低聚半乳糖醛酸肠道菌群调节剂通过增加双歧杆菌Bifidobacterium的丰度,达到改善人体消化道内环境,提高肠道菌群多样性。
6.如权利要求4所述的应用,其特征在于:所述不饱和低聚半乳糖醛酸肠道菌群调节剂通过增加乳酸杆菌Lactobacillus的丰度,达到改善人体消化道内环境。