1.一种肺纤维化治疗性牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法,其特征在于:以牛乳外泌体作为 siRNA 传递系统,将介导TGF‑β1 低表达的 siRNA 引入外泌体,形成 M‑siTGF‑β
1,即牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物,其中介导TGF‑β1 低表达的 siRNA 序列的正义链如SEQ.ID.NO.1所示,反义链 如SEQ.ID.NO.2所示。
2.如权利要求1所述的牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法,其特征在于:所述牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法是电转法,包括以下步骤:将牛乳外泌体与siRNA按比例混合在500μL的PBS溶液中,即500μL体系中;混合后4℃孵育30min,用以下方法进行电转:
220V,脉冲时间10 ms,脉冲3次,间隔时间2 s;电转后取出处理样品,置于37 °C 下孵育 1 h 以促使外泌体膜恢复。
3.如权利要求2所述的牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法,其特征在于:所述牛乳外泌体与siRNA的比例为1:1、1:5、1:10或1:15。
4.如权利要求1所述的牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法,其特征在于:所述牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法是超声法,包括以下步骤:牛乳外泌体和siRNA在PBS中以
1:5的质量比例混合,30W,6个30秒的开/关循环,每个循环之间的冷却时间为2分钟;超声处理后,将溶液在37°C下孵育30分钟,以恢复外泌体膜。
5.如权利要求1所述的牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法,其特征在于:所述牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法是改良版CaCl2法,包括以下步骤: 将siRNA与牛乳外泌体在PBS中混合,然后加入CaCl2,最终浓度为100mM;使用无菌PBS将最终体积调节至500μL;
将混合物置于冰上30分钟;在42℃下进行热冲击60秒后,将混合物在冰上再放置5分钟。
6.权利要求1‑5任一项所述的牛乳外泌体‑siTGF‑β1药物的制备方法制得的药物在制备治疗肺纤维化药物中的应用。