1.一种基于胶体金法检测尿液中HIV‑1和HIV‑2抗体的试剂盒,包括试剂条,其特征在于:所述试剂条包括PVC底板、样本垫、金标垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸;所述金标垫上包被有胶体金颗粒标记的SPA蛋白;
所述金标垫的制备包括:将标记缓冲液溶解胶体金颗粒标记的SPA蛋白,获得胶体金复合溶液,然后铺展于玻璃纤维上,干燥,制得;
所述标记缓冲液由BSA、海藻糖、聚乙二醇20000、金子释放剂和Tris‑Hcl的水溶液组成;
所述标记缓冲液中海藻糖用量为0.3‑0.5wt%;
所述标记缓冲液中聚乙二醇20000用量为0.25‑0.35wt%;
所述金子释放剂由正己基葡糖苷和十二烷基葡萄糖苷组成;
所述正己基葡糖苷和十二烷基葡萄糖苷的质量比为1:(0.4‑0.8);
所述样本垫、金标垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述PVC底板上;
所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被gp41重组抗原和gp36重组抗原的检测线,以及包被羊抗鼠 IgG多克隆抗体的质控线。
2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述标记缓冲液中海藻糖用量为0.32‑
0.48wt%。
3.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述标记缓冲液中聚乙二醇20000用量为
0.26‑0.34wt%。
4.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述标记缓冲液中金子释放剂的用量为2‑
5wt%。
5.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述正己基葡糖苷和十二烷基葡萄糖苷的质量比为1:(0.42‑0.78)。
6.如权利要求1‑5任一权利要求所述试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
1)、胶体金颗粒标记SPA蛋白的制备:用胶体金颗粒标记SPA蛋白,获得胶体金颗粒标记的SPA蛋白;
2)、金标垫的制备:利用步骤1) 获得的胶体金颗粒标记的SPA蛋白制备金标垫;
3)、将gp41重组抗原与gp36重组抗原组成的混合物,以及羊抗鼠 IgG 多克隆抗体,分别喷在硝酸纤维素膜检测线 T线和质控线 C线的位置上,烘干,制得免疫硝酸纤维素膜 ;
4)、将样本垫、金标垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸四种部件,依次粘贴在 PVC板上,切裁制得试纸条;将所述试纸条包装于包装盒中,得到所述基于胶体金法检测尿液中HIV‑1和HIV‑2抗体的试剂盒。
7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中胶体金颗粒标记的SPA蛋白的制备包括:(1)、在水中加入氯金酸水溶液,煮沸后加入柠檬酸三钠水溶液,煮沸后冷却,得到胶体金颗粒溶液;
(2)、调节pH为5‑6.9;
(3)、加入SPA蛋白搅拌;其中,所述胶体金颗粒溶液的体积用量与SPA蛋白的质量用量比为(0.5‑1.5)mL:(6‑15)μg;
(4)、加入牛血清白蛋白水溶液的封闭液搅拌;
(5)、加入质量浓度为15‑25%酪蛋白钠盐水溶液的终止剂搅拌;离心,取沉淀物,得到所述胶体金颗粒标记的SPA蛋白;其中,所述终止剂与胶体金颗粒溶液的体积比为(15‑25)μL:
1mL。
8. 如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤2) 金标垫制备的步骤包括:A、用标记缓冲液溶解胶体金颗粒标记的SPA蛋白,获得胶体金复合溶液;所述标记缓冲液由BSA、海藻糖、聚乙二醇20000、正己基葡糖苷和十二烷基葡萄糖苷组成的金子释放剂,与Tris‑Hcl的水溶液共同组成;
B、用步骤 A 制备好的胶体金复合溶液铺展于玻璃纤维上,干燥,制得金标垫。
9.如权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述标记缓冲液组成为:5‑10wt%BSA、
0.3‑0.5wt%海藻糖、0.25‑0.35wt%聚乙二醇20000、2‑5wt%由质量比为1:(0.4‑0.8)的正己基葡糖苷和十二烷基葡萄糖苷组成的金子释放剂和余量的浓度为30‑60毫摩尔/升、pH为
7.0‑8.5Tris‑Hcl的水溶液。
10.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤3)包括:喷在硝酸纤维素膜质控线C线上的羊抗鼠IgG多克隆抗体以羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液形式添加。
11. 如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤3)包括:喷在硝酸纤维素膜检测线 T线上的gp41重组抗原和gp36重组抗原混合物以同时含有gp41重组抗原和gp36重组抗原的溶液的形式添加。
12.如权利要求1‑5任意一项所述的试剂盒的应用,其特征在于,所述应用包括在检测HIV中的应用。
13.如权利要求6‑11任意一项所述的制备方法得到的试剂盒的应用,其特征在于,所述应用包括在检测HIV中的应用。