1.一种温室大棚土壤修复复合菌剂的制备方法,其特征在于,所述制备方法,由以下步骤组成:菌种活化、制备种子液、制备发酵液、制备复合菌剂;
所述菌种活化的方法为,分别对荧光假单胞菌、绿色木霉菌、产朊假丝酵母菌、多粘类芽孢杆菌进行菌种活化;
所述制备复合菌剂,由以下步骤组成:制备复合多孔微粉、微粉改性、吸附;
所述制备复合多孔微粉的方法为,对钾长石粉、硅藻土、珍珠岩进行球磨处理,制得球磨物;球磨物与纳米二氧化硅、硅烷偶联剂KH‑560混合后经振动研磨,置于密闭环境内,在纯氮气气氛环境下,以0.8‑1℃/min的升温速率,升温至350‑450℃,保温处理30‑40min;然后继续升温至550‑650℃,保温处理30‑40min,自然冷却至常温,粉碎,研磨均匀,制得复合多孔微粉;
所述制备复合多孔微粉中,钾长石粉、硅藻土、珍珠岩的重量份比值为8‑10:4‑5:2‑3;
球磨物与纳米二氧化硅、硅烷偶联剂KH‑560的重量份比值为1‑1.2:0.25‑0.3:0.1‑
0.15;
球磨处理的球料比为10‑12:1,球磨转速为100‑200rpm,球磨40‑60min;
振动研磨的球料比为15‑16:1,振动频率为1100‑1200次/min,振动研磨50‑60min;
所述微粉改性的方法为,将硅烷偶联剂改性液与γ‑聚谷氨酸溶液混合均匀,制得微粉改性液;将制得的复合多孔微粉投入至微粉改性液中,升温至35‑40℃,保温搅拌4‑6h后,保温静置3‑4h;投入乙醇溶液,静置沉淀,离心分离获得固体物,固体物经去离子水洗涤,冷冻干燥,研磨均匀,制得改性微粉;
所述微粉改性中,硅烷偶联剂改性液为硅烷偶联剂KH‑550的去离子水溶液,硅烷偶联剂改性液中硅烷偶联剂KH‑550的浓度为7‑8wt%;
γ‑聚谷氨酸溶液为γ‑聚谷氨酸的去离子水溶液,γ‑聚谷氨酸溶液中γ‑聚谷氨酸的浓度为4‑5wt%;
硅烷偶联剂改性液与γ‑聚谷氨酸溶液体积比为0.8‑0.9:1;
复合多孔微粉与微粉改性液的体积比为1:12‑15;
乙醇溶液中乙醇的体积浓度为90‑95%;
所述吸附的方法为,将制得的改性微粉投入至所述制备发酵液制得的复合发酵液中,转入至密闭环境内,抽真空至真空度为0.065‑0.075MPa,保持真空1‑2h后,恢复至常压,静置,离心分离获得固体物;固体物经去离子水淋洗后,与改性保护剂混合均匀,经冷冻干燥,制得温室大棚土壤修复复合菌剂;
所述吸附中,改性微粉与复合发酵液的重量份比值为1:20‑25;
改性保护剂的添加量为改性微粉重量的30‑40wt%;
改性保护剂的制备方法为,将海藻多糖、羟丙基淀粉、甘油、卡拉胶球磨均匀后,投入至去离子水中,搅拌均匀后;继续投入水解明胶、聚甘油脂肪酸酯,超声分散均匀,调节pH至
7.2‑7.5,灭菌,制得改性保护剂;
所述改性保护剂的制备中,海藻多糖、羟丙基淀粉、甘油、卡拉胶、水解明胶、聚甘油脂肪酸酯的重量份比值为100‑110:40‑45:35‑40:8‑10:6‑8:2‑2.5。
2.根据权利要求1所述的温室大棚土壤修复复合菌剂的制备方法,其特征在于,所述菌种活化的方法为,分别将冷冻保存的荧光假单胞菌、绿色木霉菌、产朊假丝酵母菌、多粘类芽孢杆菌在固体LB平板上进行三区划线,在35‑37℃温度环境下,培养24‑25h,分别得到活化菌株。
3.根据权利要求2所述的温室大棚土壤修复复合菌剂的制备方法,其特征在于,所述制备种子液的方法为,分别从菌种活化制得的活化菌株中挑取单菌落接种至种子培养基上,在28‑32℃温度环境下,控制摇床频率为240‑260rpm,进行摇床培养15‑17h,分别获得荧光假单胞菌种子液、绿色木霉菌种子液、产朊假丝酵母菌种子液、多粘类芽孢杆菌种子液。
4.根据权利要求3所述的温室大棚土壤修复复合菌剂的制备方法,其特征在于,所述制备发酵液的方法为,将制得的荧光假单胞菌种子液、绿色木霉菌种子液、产朊假丝酵母菌种子液、多粘类芽孢杆菌种子液依次接种至MRS液体培养基中,接种完成后进行搅拌发酵培养
22‑24h;搅拌发酵培养过程中,控制发酵温度为32‑35℃,搅拌转速为150‑200rpm,通气量为
1.3‑1.5V/V•min,发酵时间为22‑24h;搅拌发酵培养结束后制得复合发酵液;
所述制备发酵液中,荧光假单胞菌的接种量为1.2‑1.5%,绿色木霉菌的接种量为0.8‑
1%,产朊假丝酵母菌的接种量为1.2‑1.5%,多粘类芽孢杆菌的接种量为1.8‑2%。
5.一种温室大棚土壤修复复合菌剂,其特征在于,采用权利要求1‑4任一项所述的制备方法制得。