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专利号: 2023104942190
申请人: 齐鲁工业大学(山东省科学院)
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种复合微生物菌在生产2,3‑丁二醇中的应用,其特征在于,所述的复合微生物菌由过表达2,3‑丁二醇脱氢酶的枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌两种微生物菌组成;所述枯草芽孢杆菌的分类命名为Bacillus subtilis MW‑BS1,该菌株的保藏编号为CCTCC NO:M 

2022436,保藏于中国典型培养物保藏中心;所述地衣芽孢杆菌的分类命名为:地衣芽孢杆菌MW‑BL2 Bacillus licheniformis MW‑BL2,该菌株的保藏编号为CCTCC NO:M 2023474,保藏于中国典型培养物保藏中心,所述的2,3‑丁二醇脱氢酶的编码基因为bdhA,即Gene ID:939490。

2.如权利要求1所述的一种复合微生物菌在生产2,3‑丁二醇中的应用,其特征在于,在

2,3‑丁二醇的生产过程中,所使用的枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的接种体积之比为2 4:~

1。

3.如权利要求1所述的一种复合微生物菌在生产2,3‑丁二醇中的应用,其特征在于,所述复合微生物菌的发酵培养基包括:葡萄糖40 100 g/L、玉米浆干粉10 20 g/L、酵母浸粉5~ ~~20 g/L、尿素1~9 g/L、K2HPO4 4~16 g/L、KH2PO4 2~10 g/L。

4.利用权利要求1中所述的复合微生物菌来生产2,3‑丁二醇的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)分别制备微生物菌枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌;

(2)将(1)中制备好的两个微生物菌种分别进行活化;

(3)复合微生物菌发酵:将(2)中经活化后的微生物菌种制备成种子液,按比例混合制成复合微生物菌,然后接种至含有发酵培养基的容器中进行发酵。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,(1)中微生物菌的制备方法如下:首先,构建双启动子表达载体,并连接2,3‑丁二醇脱氢酶的编码基因bdhA,即Gene ID:

939490;然后,将其导入到原始的枯草芽孢杆菌BS1和地衣芽孢杆菌BL1菌株中,以此来过表达2,3‑丁二醇脱氢酶,即获得能够生产2,3‑丁二醇的基因工程菌株Bacillus subtilis MW‑BS1与Bacillus licheniformis MW‑BL2。

6.如权利要求4所述的方法,其特征在于,(2)中微生物菌的活化具体操作为:取(1)中制备好的菌株分别接种于有固体LB培养基的平板中,恒温倒置培养10 15 h,分别挑取平板~中的单菌落于液体LB培养基中,100 250 r/min,恒温摇床培养10 15 h,其中,所述的LB培~ ~养基,包括:酵母浸粉3 6 g/L,胰蛋白胨8 12 g/L,NaCl 8 15 g/L。

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7.如权利要求4所述的方法,其特征在于,(3)中,将制备好的微生物菌的种子液,以枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌按2 4:1的体积比混合,制备成复合微生物菌,然后按照4% 12%~ ~的接种量将其接种至含有发酵培养基的容器中进行发酵。

8.如权利要求4所述的方法,其特征在于,(3)中,复合微生物菌的发酵条件为:温度28~

40℃,pH为6 7,震荡速度为100 250 r/min,通气量为0.5 1.5 L/min。

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9.如权利要求1所述的一种复合微生物菌在生产2,3‑丁二醇中的应用,其特征在于,包括以下步骤:(1)微生物菌的制备:首先,构建双启动子表达载体,并连接2,3‑丁二醇脱氢酶的编码基因bdhA,即Gene ID:939490;然后,将其导入到原始的枯草芽孢杆菌BS1和地衣芽孢杆菌BL1菌株中,以此来过表达2,3‑丁二醇脱氢酶,即获得能够生产2,3‑丁二醇的基因工程菌株;

(2)复合微生物菌种活化:将(1)中获得的基因工程菌分别接种于有固体LB培养基的平板中,恒温倒置培养10 15 h,分别挑取平板中的单菌落于液体LB培养基中,100 250 r/~ ~min,恒温摇床培养10 15 h;

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(3)复合微生物菌发酵:(2)中经活化后的微生物菌按照3% 6%的接种量接到液体LB培~养基中,35 40℃恒温培养6 10 h作为种子液,然后将枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的种子~ ~液以2 4:1的体积比混合制备成复合微生物菌,并按照的4% 12%接种量将复合微生物菌接~ ~种至含有发酵培养基的容器中进行发酵,其中,复合微生物菌的发酵条件为:温度28 40℃,~pH为6 7,震荡速度为100 250 r/min,通气量为0.5 1.5 L/min。

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