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专利号: 2023102999349
申请人: 山东和生菌业科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-08-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种促进羊肚菌果实化的培育方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)使用原生质体融合技术对羊肚菌进行种间杂交,得到杂交菌种,其具体步骤为:在无菌操作台上,将M.importuna和M.sextelata羊肚菌使用75%乙醇溶液洗涤,随后取柄盖交界处组织,分别使用完全酵母提取物培养基培养1天,并在4℃下保存;

分别将菌丝依次使用无菌蒸馏水和0.6mol/L甘露醇溶液洗涤3次后,加入酶解液中,以

50rpm速率摇动,并在30℃下孵育3小时,随后过滤,使用0.6mol/L甘露醇溶液洗涤,将滤液在室温下以2000rpm速率离心,收集沉淀,即得M.importuna和M.sextelata羊肚菌原生质体;

将M.importuna羊肚菌原生质体在45℃下加热20分钟进行灭活处理;再将M.sextelata羊肚菌原生质体使用30w紫外线照射5分钟,照射距离30cm,得到灭活的M.importuna和M.sextelata羊肚菌原生质体;

向完全酵母提取物培养基中加入0.6mol/L甘露醇溶液,得到洗涤液,备用;

将灭活的M.importuna和M.sextelata羊肚菌原生质体加入含有0.05mol/L CaCl2的PEG溶液中,静置10分钟后,间隔5分钟分次加入洗涤液洗涤,过滤后转移到新鲜的完全酵母提取物培养基斜面上进行培养1‑2天,随后收集生长的菌丝放置在完全酵母提取物培养基板的中心,在25℃和黑暗条件下孵育14天,得到杂交菌种;

(2)将种植土壤进行表面火处理,具体步骤为:选择一片矩形沙壤土作为种植土壤,使用干燥的松科树枝,均匀的覆盖在地面上,选择矩形的四角作为着火点进行点火,直至火焰自然熄灭,静置350天;

(3)使用改良琼脂培养基对杂交菌种进行培养,所述改良琼脂培养基的配方为:琼脂培养基20g/L、琼脂椰子水20g/L、琼脂植物提取物20g/L、琼脂乳糖20g/L,所述植物提取物由山毛榉木的水提取物、麦芽的无水丙酮提取物和石榴皮提取物以10:10:2‑4的质量比混合得到;

(4)在表面火处理后的土壤上进行播种,铺设黑地膜,待菌丝出土后放置外源营养袋,待菌体出土后,保持空气湿度在85%‑90%,土壤含水量在20%‑23%,环境温度在10‑15℃;

菌种果实化后,保持环境温度在5‑20℃,二氧化碳含量在400‑600ppm,当发育的子囊果长至2cm后,控制土壤含水量保持在18%‑23%,空气湿度为85%‑95%,子囊果盖网完全打开后采收,即得羊肚菌。

2.根据权利要求1所述的一种促进羊肚菌果实化的培育方法,其特征在于,所述酶解液由真菌溶壁酶和蜗牛酶在0.6mol/L甘露醇溶液中混合制得,酶解液与菌丝的质量体积比为

1g:5mL。

3.根据权利要求2所述的一种促进羊肚菌果实化的培育方法,其特征在于,所述PEG溶液为25%浓度的PEG‑4000溶液。

4.根据权利要求1所述的一种促进羊肚菌果实化的培育方法,其特征在于,干燥的松科2

树枝的覆盖密度为1‑2.7kg/m。

5.根据权利要求1所述的一种促进羊肚菌果实化的培育方法,其特征在于,石榴皮提取物由以下步骤制得:选用植物品种编号为20200304的“赤艳”石榴,使用去离子水洗涤后,晾干去皮;将果皮冷冻干燥后在‑80℃下保存,将冻干的果皮在研钵中研磨成粉末,将粉末置于蒸馏水中进行高压灭菌,随后在4000×g下离心15分钟,弃去沉淀,将上清液通过0.45μm滤膜进行过滤,冷冻干燥后即得石榴皮提取物。

6.根据权利要求5所述的一种促进羊肚菌果实化的培育方法,其特征在于,外源营养袋由以下步骤制得:将成分为47.65%2cm长的小麦秸秆,47.65%的鸡粪,1.50%的菜籽粕,0.50%的尿素,

0.80%的磷酸氢钙,1.00%的石灰,0.60%的石膏制成起始堆肥,0.15%硫酸镁和0.15%硫酸钾的堆肥原料在搅拌机中充分混合,随后填充至固体发酵罐中,每天翻转发酵罐,堆肥发酵30天,得到堆肥混合物;

3

将堆肥混合物装入曝气池中,在恒定通气条件下发酵12天,通风速率为10m/分钟,随后在第二天将温度升至70℃,维持一周,然后自然下降到40℃,随后将堆肥混合物搅拌混合,并重新填充到充气池中,将温度再次升高到60℃,每小时曝气10分钟,继续发酵18天,随后自然下降到30℃,将堆肥混合物干燥至水分含量低于10%,均质并过50目筛后装入袋中,即得外源营养袋。