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专利号: 2023100631794
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-09-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种西蓝花外泌体的提取方法,其特征在于:

(1)将西蓝花原料清洗,切碎,与PBS缓冲液混匀后打成浆状物、过滤,取滤液;其中PBS缓冲液与西蓝花的质量比为1:4‑1:2;

(2)将步骤1得到的滤液重复数次低速离心,其中每次离心后取上层清液再次离心;

(3)将步骤2重复数次离心后得到的上层清液超速离心,取沉淀物,用PBS缓冲液重悬,形成悬浮液;

(4)将步骤3所得悬浮液加入到具有梯度浓度的蔗糖溶液中进行超速离心,收集且合并不同浓度的蔗糖溶液层之间的条带,所述条带为离心后在不同浓度蔗糖溶液层之间形成的绿色条状悬浮部分;

(5)将步骤4所得条带与PBS缓冲液混合、超速离心,除去蔗糖,所得沉淀物为西蓝花外泌体;

所述超速离心条件为100000g‑150000g,90min‑150min。

2.根据权利要求1所述的一种西蓝花外泌体的提取方法,其特征在于:所述PBS缓冲液的温度为4℃±1℃。

3.根据权利要求2所述的一种西蓝花外泌体的提取方法,其特征在于:步骤2重复离心次数为3次,第一次离心条件为500g‑1500g、5min‑15min,第二次离心条件为3000g‑5000g、

30min‑50min,第三次离心条件为8000g‑12000g、40min‑80min。

4.根据权利要求3所述的一种西蓝花外泌体的提取方法,其特征在于:步骤2中第一次离心条件为1500g、15min;第二次离心条件为5000g、50min;第三次离心条件为12000g、

80min。

5.根据权利要求4所述的一种西蓝花外泌体的提取方法,其特征在于:步骤4中蔗糖溶液的浓度分别为60%、45%、30%、15%和8%,并按照浓度由高到底的顺序依次加入到离心管中。

6.根据权利要求5所述的一种西蓝花外泌体的提取方法,其特征在于:步骤3、步骤4和步骤5超速离心条件为150000g、120min。

7.权利要求1‑6任一项所述的提取方法得到的西蓝花外泌体作为制备缓解便秘中药物的应用。