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专利号: 2023100069951
申请人: 烟台大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于环糊精‑金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,其特征在于,环糊精‑金刚烷化铱络合物标记材料的制备步骤如下:

1)以金纳米颗粒AuNPs、银纳米颗粒AgNPs、聚苯乙烯微球PS或二氧化硅微球SiO2为载体,首先与标记抗体Ab1直接混合修饰或采用缩合剂活化后偶联,得到Ab1标记的纳米材料AuNPs@Ab1或AgNPs@Ab1或PS@Ab1或SiO2@Ab1;

所述的缩合剂为1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐EDCI、N‑羟基琥珀酰亚胺NHS;

2)将AuNPs@Ab1或AgNPs@Ab1或PS@Ab1或SiO2@Ab1进一步与巯基或双硫键或氨基功能化β‑环糊精混合振荡2到24小时,接着采用封闭剂胎牛血清蛋白BSA或脱脂奶粉或酪蛋白或吐温进行孵化封闭后得到环糊精功能化的Ab1标记的金纳米颗粒AuNPs‑Ab1@CD或AgNPs‑Ab1@CD或PS‑Ab1@CD或SiO2‑Ab1@CD;

3)将AuNPs‑Ab1@CD或AgNPs‑Ab1@CD或PS‑Ab1@CD或SiO2‑Ab1@CD在金刚烷化铱络合物溶液中孵化1‑24小时,得到环糊精‑金刚烷主客体修饰的铱络合物标记纳米材料AuNPs‑Ab1@CD@Ir或AgNPs‑Ab1@CD@Ir或PS‑Ab1@CD@Ir或SiO2‑Ab1@CD@Ir;

相应的蛋白标记物的分析包括如下步骤:

4)在载体酶标板或磁性纳米颗粒上负载包被抗体Ab2,并用封闭蛋白BSA进行孵化封闭,得到Ab2负载的载体材料S@Ab2;

5)在S@Ab2缓冲溶液中,加入待测蛋白AG,使待测蛋白AG与载体上的包被抗体Ab2特异性结合得到S‑Ab2@AG;

6)在S‑Ab2@AG中加入步骤3)得到的铱络合物标记纳米颗粒AuNPs‑Ab1@CD@Ir或AgNPs‑Ab1@CD@Ir或PS‑Ab1@CD@Ir或SiO2‑Ab1@CD@Ir,实现铱络合物对待测蛋白AG的标记;

7)向步骤6得到的标记材料中,加入含有氧化还原荧光探针和氢源的荧光检测液,在0‑

100摄氏度温度,孵化反应0‑120分钟后,测试溶液的荧光强度变化,从而实现对待测蛋白AG的定量检测;

所述的氢源为甲酸或甲酸钠或甲酸钾或甲酸铵或甲酸三乙胺或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐NADH。

2.根据权利要求1所述的一种基于环糊精‑金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,其步骤1)所述纳米颗粒均为单分散型纳米颗粒,直径为1nm‑5000nm,形貌包括球形或棒状或菱形。

3.根据权利要求1所述的一种基于环糊精‑金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,其特征在于:步骤3)所述的金刚烷化铱络合物,其结构中均包含有金刚烷官能团,能够与β‑环糊精形成牢固的主客体结合体。

4.根据权利要求1所述的一种基于环糊精‑金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,其特征在于,荧光信号的产生放大为铱络合物催化氧化还原型荧光探针发生加氢还原反应产生,荧光探针分子中均含有氧化官能团,并且当荧光探针分子中的氧化官能团被加氢还原为相应的还原态后,探针会产生明显的荧光增强或减弱;

所述的氧化官能团为苯醌或萘醌或蒽醌或硝基或羰基或烟酰胺盐或醛基或吡啶盐;

所述的氧化官能团被加氢还原后为苯二酚或萘二酚或蒽二酚或氨基或羟基或烟酰胺盐或甲羟基或二氢吡啶;

荧光发色团主要包括:香豆素类、罗丹明、氧杂蒽类、萘二甲酰亚胺类、苯并恶唑类、二苯乙烯类、噻吩二羧酸酰胺类、稠环芳烃类、苝四甲酰亚胺类。

5.根据权利要求1所述的一种基于环糊精‑金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,其特征在于,金属铱络合物的结构中均包含金刚烷官能团。

6.根据权利要求1所述的一种基于环糊精‑金刚烷化铱络合物主客体组装标记的蛋白标记物荧光检测方法,其特征在于,步骤3)与步骤4)的顺序不能颠倒,必须保证采用胎牛血清蛋白BSA或脱脂奶粉或酪蛋白或吐温封闭完成后,方可引入金刚烷化铱络合物。