1.一种保持稳定性状的小鼠骨髓树突状细胞的原代培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将离断得到的小鼠的股骨和胫骨,冲洗骨髓干细胞,利用注射器吸取1 ml RPMI‑
1640培养基从骨骺端刺入骨髓腔中并从另一端刺出,脉冲式推动注射器,反复冲洗骨髓腔,直至股骨、胫骨变白,得到冲洗下来的骨髓细胞(2)将所得骨髓细胞离心,弃上清,将沉淀中加入红细胞裂解液,混匀后冰上静置,加入PBS后离心后弃上清;
(3)将离心所得的细胞悬于RPMI‑1640基础培养基中,悬液过200目细胞筛收集起置于离心管中,离心后弃上清;
(4)将离心所得细胞重悬于完全培养基混匀,接种于6孔板中,置于培养箱中采用梯度式CO2培养;
(5)培养结束后,弃去上清液以及悬浮细胞,加入等量的完全培养基;
(6)第4、6天半量更换完全培养基;
(7)第7‑8天,收获BMDC。
2.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,步骤(2)中,所述红细胞裂解液包含8.1 g/L的氯化铵,2.5 g/L的KHCO3和0.37g/L的聚氧乙烯‑8‑辛基苯基醚,pH 7.2‑7.4;
每1mL沉淀中加入5‑8mL红细胞裂解液。
3.根据权利要求1或2所述的原代培养方法,其特征在于,步骤(2)中,所述完全培养基的组成为:含有10%胎牛血清,15 ng/ml GM‑CSF,10 ng/ml IL‑4,1%青霉素‑链霉素,1%丝素蛋白的RPMI‑1640培养基。
4.根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,步骤(2)和(3)中,所述离心的条件均为4℃,1500 rpm,3‑5 min。
5.根据权利要求1或3所述的原代培养方法,其特征在于,步骤(4)中,所述梯度式CO2培养的具体过程为:首先培养箱中3% CO2条件下培养12h,然后在5% CO2条件下培养36h;所述培养的温度为37℃。