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专利号: 2022111154258
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种Pt NPs@TPB NCs/溶解O2的三元电致化学发光体系,其特征在于,所述三元电致化学发光体系包括:四苯基‑1,3‑丁二烯纳米晶TPB NCs与内源性共反应剂溶解O2以及溶解O2的共反应促进剂铂纳米粒子Pt NPs构成的Pt NPs@TPB NCs/溶解O2 ECL信号体系;

所述铂纳米粒子包裹四苯基‑1,3‑丁二烯纳米晶Pt NPs@TPB NCs作为ECL发光材料,所述共反应促进剂Pt NPs是以柠檬酸钠为保护剂制备而成;

Pt NPs@TPB NCs的制备方法包括如下步骤:A.1.将TPB NCs分散到去离子水中以获得均匀的TPB NCs溶液,A.2.将柠檬酸钠和H2PtCl6水溶液注入所述TPB NCs溶液中搅拌,在连续搅拌下快速加入冰冷NaBH4溶液;

A.3.溶液颜色变成深棕色后离心,将沉淀物溶解在去离子水中,得到Pt NPs@TPB NCs溶液。

2.根据权利要求1所述的三元电致化学发光体系的构建方法,其特征在于,所述方法包括步骤:A.制备铂纳米粒子包裹的四苯基‑1,3‑丁二烯纳米晶Pt NPs@TPB NCs作为ECL发光材料;

B.将Pt NPs@TPB NCs溶液涂在玻碳电极GCE表面,干燥成膜后,将所述电极置于空气饱和的PBS溶液中获得Pt NPs@TPB NCs/GCE的ECL响应。

3.根据权利要求2所述的三元电致化学发光体系的构建方法,其特征在于,所述TPB NCs的制备步骤包括:A.1.1将四苯基‑1,3‑丁二烯粉末溶解在四氢呋喃中,得到TPB溶液;

A.1.2将TPB溶液逐滴注入泊洛沙姆188溶液中进行超声处理;

A.1.3除去THF后,将溶液离心并用去离子水反复洗涤,离心,得到TPB NCs沉淀,将其溶于去离子水中得到所述TPB NCs。

4.基于权利要求1所述三元电致化学发光体系的生物传感器,其特征在于,所述生物传感器包括:I.权利要求1所述的三元电致化学发光体系,并且GCE滴加己硫醇封闭非特异性位点;

Ⅱ.修饰到GCE上的核苷酸捕获探针;

Ⅲ.待测物诱导的DNA步行放大器。

5.根据权利要求4所述三元电致化学发光体系的生物传感器的制备方法,其特征在于,所述方法包括步骤:(1)将Pt NPs@TPB NCs溶液涂在GCE表面上,在37ºC的培养箱中干燥;

(2)将带有氨基的捕获探针修饰到GCE上,在4 ºC下孵育过夜;

(3)用去离子水冲洗后,将修饰的GCE滴加己硫醇,封闭非特异性位点,得到生物传感器;

(4)待测物诱导的DNA步行器放大产物溶液在制备的所述生物传感器上孵育,PBS 洗涤后,在空气饱和的PBS溶液中测量生物传感器的ECL信号。

6.根据权利要求5所述三元电致化学发光体系的生物传感器的制备方法,其特征在于,所述待测物诱导的DNA步行器放大产物溶液的制备步骤是:(a.)将DNA发夹探针HP形成茎环结构,同时底物DNA SD和二茂铁修饰的DNA探针P‑Fc形成双链体结构SD/P‑Fc;

(b.)将羧基包裹的磁珠MBs用1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC活化,并与标记有氨基的HP和SD/P‑Fc以及N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶液混合,在4°C下摇晃过夜,通过酰胺键将所述HP和SD/P‑Fc交联在MBs上组装DNA步行器;

2+

(c.)磁性分离后,将DNA步行器重新分散在含有不同浓度目标物miRNA‑21和Pb 的反应液中30 ℃反应2小时;

(d.)通过磁分离收集含有SD/P‑Fc的上清液作为DNA步行器放大产物溶液。

7.根据权利要求4所述生物传感器的应用,其特征在于,所述应用是检测细胞中miRNA‑

21的表达水平。

8.根据权利要求7所述生物传感器的应用,其特征在于,所述应用包括步骤:a.将细胞裂解液中的miRNA‑21诱导的DNA步行器放大反应后孵育到所述生物传感器中;

b.检测ECL信号;

c.当待检细胞随着细胞个数增加,传感器的ECL响应略有下降,则miRNA‑21在细胞中低表达;ECL信号明显降低,则表明miRNA‑21在细胞中高表达。