1.脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型的建立方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
1)Caco‑2细胞在MEM培养基,RAW264.7细胞在DMEM培养基中分别进行细胞培养;培养条件为pH 7.4,5%CO2,37℃,95%空气,恒湿培养21天,培养基每隔1‑2天更换一次;
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2)将步骤1)培养结束后的Caco‑2细胞以1×10个/孔密度接种于24孔Transwell板上室的AP侧,PC膜,4μm,和步骤1)相同的培养条件下孵化21天,每24小时跟换一次培养液;
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3)RAW 264.7细胞以1×10个/孔的密度接种于24孔板,和步骤1)相同的培养条件下孵化1天;
4)将孵化21天的载有Caco‑2细胞的Transwell上室转移到孵化1天的载有RAW264.7细胞的24孔板,此时AP侧为Caco‑2细胞,BL侧为RAW264.7细胞;
5)将脂多糖溶于PBS中,配置成50μg/mL的母液,过0.22μm针孔式过滤器;用10%DMEM培养基稀释成1μg/mL LPS‑10%DMEM溶液;
6)在BL侧加入1μg/mL的LPS‑10%DMEM培养基孵化3h,用ELISA试剂盒检测AP侧炎症因子浓度,形成肠道炎症模型。
2.如权利要求1所述的脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型的建立方法,其特征在于步骤1)中MEM培养基中含有20%胎牛血清、1%HEPES、1%NEAA、1%L‑谷氨酰胺、1%丙酮酸钠、100U/mL青霉素和100 mg/mL链霉素。
3.如权利要求1所述的脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型的建立方法,其特征在于步骤1)中DMEM培养基中含有10%胎牛血清、1%HEPES、1%NEAA、1%L‑谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100 mg/mL链霉素。
4.如权利要求1所述的脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型的建立方法,其‑2特征在于步骤2)中平均每三天检测一次细胞的跨膜电阻值,跨膜电阻值大于300Ωcm 即可视为单层致密完整。
5.如权利要求1所述的脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型的建立方法,其特征在于步骤2)中平均7天检测一次碱性磷酸酶活性,上室AP侧/下室BL侧比值越大说明细胞极化程度越高。
6.权利要求1‑5任一所述的脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型在研究其对矢车菊素‑3‑葡萄糖苷纳米脂质体吸收作用中的应用。