利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2022108609031
申请人: 汇佳网(天津)科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-08
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种植物生长调节剂的制备方法,其特征在于,将玉米秸秆、荞麦种子和油菜花粉混合后得到组合物,经过复合酶酶解得到的酶解产物中接种由酵母菌、枯草芽孢杆菌和紫红曲霉得到的复合发酵菌液,进行发酵,得到发酵产物,与助剂、水混合均匀,得到植物生长调节剂;所述复合酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶的复配混合物;所述玉米秸秆、荞麦种子和油菜花粉的质量比为(5‑10):(3‑5):(2‑7);所述复合酶中纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶的质量比为(5‑12):(2‑5):(1‑3);所述组合物、水、复合酶的质量比为20:(70‑100):(1‑3);所述酶解的条件为35‑45℃酶解3‑5h;所述复合发酵菌液和酶解产物的质量比为2:(3‑5);所述发酵的条件为36‑38℃发酵培养48‑72h;所述酵母菌为安琪高活性干酵母,购于安琪酵母股份有限公司;所述枯草芽孢杆菌购于欧科拜克生物技术股份有限公司;所述紫红曲霉为ACCC 30352紫红曲霉,购自上海复祥生物科技有限公司;所述发酵产物、助剂、水的质量比为(2‑5):(2‑4):100。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1.组合物的制备:将玉米秸秆、荞麦种子和油菜花粉分别洗净,干燥,粉碎,混合均匀,得到组合物;

S2.酶解:将步骤S1中组合物加入水中,加入复合酶酶解,灭酶,得到酶解产物;所述复合酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶的复配混合物;

S3.酵母菌和枯草芽孢杆菌的活化:将酵母菌和枯草芽孢杆菌分别接种到高氏培养基中,活化培养,然后培养成活化菌种液;

S4.紫红曲霉的活化:将紫红曲霉接种到PDA培养基,活化培养,得到活化紫红曲霉;

S5.紫红曲霉孢子悬浮液的制备:将步骤S4中活化紫红曲霉加入无菌水,用接种环刮取琼脂表面,使孢子被刮下,收集孢子悬浮液,振荡,用无菌滤纸过滤,计数,重新加入无菌水,得到紫红曲霉孢子悬浮液;

S6.液体培养基的制备:将碳源、氮源、维生素和无机盐用无菌水溶解,混合均匀后,用PBS溶液调节培养基pH值,紫外线灭菌备用;

S7.菌种种子液的制备:将步骤S3中得到的酵母菌活化菌种液和枯草芽孢杆菌活化菌种液,以及步骤S5得到的紫红曲霉孢子悬浮液分别接种于步骤S6制得的液体培养基中,培养,得到菌种种子液;

S8.复合发酵菌液的制备:将步骤S7得到的酵母菌、枯草芽孢杆菌和紫红曲霉菌种种子液等体积混合并稀释,得到复合发酵菌液;

S9.发酵:将步骤S8制得的复合发酵菌液加入步骤S2制得的酶解产物中,发酵,过滤,固体用无菌水洗涤,合并洗涤液和滤液,冷冻干燥,得到发酵产物;

S10.植物生长调节剂的制备:将步骤S9制得的发酵产物、助剂和水混合均匀,得到植物生长调节剂。

3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S3中所述酵母菌和枯草芽孢杆菌的接种量为1‑3%和2‑4%;所述活化培养的条件为35‑40℃,培养时间为24‑36h;步骤S4中所述紫红曲霉的接种量为3‑5%,所述活化培养的条件为35‑40℃,培养时间为24‑36h;步骤S5

5 6

中所述紫红曲霉孢子悬浮液的孢子浓度为10‑10个/mL。

4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S6中所述碳源选自糖蜜、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖、可溶性淀粉中的一种或几种混合;所述氮源选自蛋白胨、鱼粉、氨水、尿素、铵盐、硝酸盐、氨基酸;所述维生素选自维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素D、维生素E中的一种或几种混合;所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中的一种或几种混合;所述氨基酸选自丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸中的一种或几种混合;所述碳源、氮源、维生素、无机盐和无菌水的质量比为(7‑12):(2‑5):(0.02‑0.15):(0.4‑1):100;所述培养基pH值调节为6.7‑7.0。

5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S7中所述培养的条件为35‑40℃,

7 8

培养时间为36‑48h,所述菌种种子液的含菌量为10‑10cfu/mL;步骤S8中所述稀释倍数为

100‑200倍。

6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S10中所述助剂包括成膜剂、增稠剂、分散剂、润湿剂、表面活性剂中的至少一种;所述成膜剂选自海藻粉、羟甲基纤维素钠和甲壳素中的至少一种;所述增稠剂选自黄原胶、羟甲基纤维素、明胶、海藻类、石膏、羟乙基纤维素、甲基纤维素、硅酸镁铝和聚乙烯醇中的至少一种;所述分散剂选自MorwetD‑425、Terspense‑2500、萘磺酸盐、木质素磺酸盐和聚羧酸盐中的至少一种;所述润湿剂选自十二烷基硫酸钠、Morwet EFW、聚氧乙烯烷基酚醚、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物中的至少一种;所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基苯磺酸钠、十六烷基磺酸钠、十六烷基硫酸钠、十八烷基苯磺酸钠、十八烷基磺酸钠、吐温‑80中的至少一种。

7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:

S1.组合物的制备:将5‑10重量份玉米秸秆、3‑5重量份荞麦种子和2‑7重量份油菜花粉分别洗净,干燥,粉碎,混合均匀,得到组合物;

S2.酶解:将20重量份步骤S1中组合物加入70‑100重量份的水中,加入1‑3重量份复合酶,35‑45℃酶解3‑5h,105‑110℃灭酶10‑15min,得到酶解产物;复合酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶和果胶酶的复配混合物,质量比为(5‑12):(2‑5):(1‑3);

S3.酵母菌和枯草芽孢杆菌的活化:将酵母菌和枯草芽孢杆菌分别接种到高氏培养基中,接种量分别为1‑3%和2‑4%,35‑40℃活化培养24‑36h,然后培养成活化菌种液;

S4.紫红曲霉的活化:将紫红曲霉接种到PDA培养基,接种量为3‑5%,35‑40℃活化培养

24‑36h,得到活化紫红曲霉;

S5.紫红曲霉孢子悬浮液的制备:将步骤S4中活化紫红曲霉加入无菌水,用接种环刮取琼脂表面,使孢子被刮下,收集孢子悬浮液,振荡10‑20min,用无菌滤纸过滤,计数,重新加

5 6

入无菌水,得到紫红曲霉孢子悬浮液,孢子浓度为10‑10个/mL;

S6.液体培养基的制备:将7‑12重量份碳源、2‑5重量份氮源、0.02‑0.15重量份维生素和0.4‑1重量份无机盐用100重量份无菌水溶解,混合均匀后,用PBS溶液调节培养基pH值为

6.7‑7.0,紫外线灭菌备用;

S7.菌种种子液的制备:将步骤S3中得到的酵母菌活化菌种液和枯草芽孢杆菌活化菌种液,以及步骤S5得到的紫红曲霉孢子悬浮液分别接种于步骤S6制得的液体培养基中,35‑

7 8

40℃培养36‑48h,得到菌种种子液,含菌量为10‑10cfu/mL;

S8.复合发酵菌液的制备:将步骤S7得到的酵母菌、枯草芽孢杆菌和紫红曲霉菌种种子液等体积混合并稀释100‑200倍,得到复合发酵菌液;

S9.发酵:将2重量份步骤S8制得的复合发酵菌液加入3‑5重量份步骤S2制得的酶解产物中,36‑38℃发酵培养48‑72h,过滤,固体用无菌水洗涤,合并洗涤液和滤液,冷冻干燥,得到发酵产物;

S10.植物生长调节剂的制备:将2‑5重量份步骤S9制得的发酵产物、2‑4重量份助剂和

100重量份水混合均匀,得到植物生长调节剂。

8.一种如权利要求1‑7任一项所述的制备方法制得的植物生长调节剂。