1.一种含木质素分解酶基因的转化载体,其特征在于,所述转化载体的基础载体包括pKLAC1载体;所述木质素分解酶基因包括lipH8基因、lip2基因、mnp3基因或mnp2基因;
当所述木质素分解酶基因为lipH8基因时,所述lipH8基因位于基础载体的BglⅡ和StuⅠ酶切位点之间;
当所述木质素分解酶基因为lip2基因时,所述lip2基因位于基础载体的BglⅡ和KpnⅠ酶切位点之间;
当所述木质素分解酶基因为mnp2基因时,所述mnp2基因位于基础载体的BglⅡ和KpnⅠ酶切位点之间;
当所述木质素分解酶基因为mnp3基因时,所述mnp3基因位于基础载体的AvrⅡ和StuⅠ酶切位点之间。
2.一种分泌木质素分解酶的工程菌,其特征在于,所述工程菌的构建方法包括以下步骤:将权利要求1所述转化载体用SacⅡ酶进行切割,得到含木质素分解酶基因的线性表达框;
将所述线性表达框插入到乳酸克鲁维酵母菌基因组LAC4启动子同源框中,筛选得到分泌木质素分解酶的工程菌,分别命名为GG799‑TgN(pKLAC1‑lipH8)‑LCEL1、GG799‑TgN(pKLAC1‑lip2)‑LCEL1、GG799‑TgN(pKLAC1‑mnp3)‑LCEL1、GG799‑TgN(pKLAC1‑mnp2)‑LCEL1。
3.根据权利要求2所述的工程菌,其特征在于,所述筛选的培养基包括:以乙酰胺为氮源的YCB培养基。
4.权利要求1所述表达载体或权利要求2或3所述工程菌在制备木质素分解酶中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:将权利要求2或3所述工程菌在含有半乳糖的诱导培养基中培养,得到木质素分解酶。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述诱导培养基包括碳源基础培养基、乙酰胺5mmol/L和半乳糖20g/L,或YP培养基和半乳糖20g/L;
所述碳源基础培养基包括YCB培养基、YCBGal培养基;
所述YCBGal培养基是将YCB培养基中的葡萄糖替换为等质量的半乳糖配制得到的培养基;
所述YP培养基包括:酵母浸出物10g/L和蛋白胨20g/L。
7.根据权利要求5或6所述的应用,其特征在于,所述诱导培养基还包括氯化血红素33~100mg/L和复合蛋白酶抑制剂0~100μL/L。
8.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述培养温度为20~30℃,培养时间为24~60h。
9.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述工程菌在诱导培养基中培养前还包括:将所述工程菌在以乙酰胺为氮源的YCB培养基中预培养12~48h。
10.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述培养后还包括:将培养结束后的培养液离心,得到上清液和沉淀;所述上清液含有可溶性的木质素分解酶;
将所述沉淀与浸提液混合,得到溶于浸提液的木质素分解酶和菌体沉淀;
所述浸提液包括甘油和缓冲液;所述缓冲液包括酒石酸钠缓冲液或琥铂酸钠缓冲液。