1.一种基于个人血糖计检测多菌灵残留的方法，包括：制备sAb/DNA‑AuNPs探针；

基于AuNPs的间接竞争酶联免疫吸附的建立；以及快速检测；

其检测原理为：在AuNPs上同时偶联二抗和碱性磷酸酶，ALP可催化葡萄糖‑1‑磷酸二钠盐脱磷酸生成葡萄糖分子，最后采用个人血糖仪对溶液中的葡萄糖浓度进行读取，以实现多菌灵的便携式定量检测；其中：为了将ALP通过SA‑biotin相互作用的策略修饰到AuNPs的表面，以保留ALP的酶催化和SA‑biotin信号放大系统的双重信号放大功能，在AuNPs表面首先修饰上sAb和单链DNA，得到sAb/DNA‑AuNPs探针，随后通过末端脱氧核苷酸转移酶对单链DNA进行延伸，在延伸的过程中，加入生物素修饰的三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸，即可获得延伸DNA上多个位点的生物素修饰，最后通过生物素‑链霉亲和素相互作用，将大量的链霉亲和素标记的碱性磷酸酶修饰到AuNPs的表面，从而实现检测信号的高效放大；

当样品中不含有多菌灵时，单克隆抗体与包被抗原多菌灵‑BSA特异性结合形成复合物，加入sAb/DNA‑AuNPs探针后，探针上的sAb与mAb高效结合，依次加入TdT、biotin‑16‑dCTP、SA‑ALP，大量ALP被成功修饰到AuNPs的表面，通过ALP高效去除底物G‑1‑P中的磷酸基团，生成葡萄糖，导致溶液PGM信号升高；

当样品中含有多菌灵时，由于多菌灵和多菌灵‑BSA竞争结合mAb，导致酶标板上捕获的sAb/DNA‑AuNPs探针减少，最终导致溶液PGM信号降低。

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述AuNPs溶液由如下方法合成：

在磁力搅拌下，将100mL 1.0mM HAuCl4溶液加热至沸腾，并加入400mM柠檬酸钠溶液

1mL，得第一混合溶液；

在磁力搅拌下将第一混合溶液继续加热并持续沸腾8 10min，停止加热；溶液自然冷却~至室温，4℃冰箱保存，即得AuNPs溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其中：

在AuNPs溶液合成前，还包括使用王水对使用的玻璃器皿浸泡处理15 20min，然后用超~纯水洗净、烘干备用。

4.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述sAb/DNA‑AuNPs探针的制备包括：(1)采用透析方式对sAb进行纯化：

取1mL sAb加入透析袋，将密封好的透析袋放入含有10mM PB的烧杯中，置于4℃冰箱内进行透析，得纯化sAb备用；

(2)对SH‑DNA进行预处理：

向30μL、100μM的SH‑DNA中加入2μL、1M的Na3 PO4溶液和2μL、30mM的TCEP溶液，混合均匀后在25℃下反应2h；将反应液加入到超滤管中，并在10000r/min条件下离心20min，洗涤8次后得预处理SH‑DNA，置于4℃冰箱中保存备用；

(3)取100μL AuNPs，用0.1M K2 CO3将其pH调至9后向其中加入4μL预处理SH‑DNA，在4℃下反应16h，得第一混合溶液；

(4)向第一混合溶液中加入27.5μL含有10％PEG20000的PB，加入2μL纯化sAb，室温孵育

30min后加入15μLNaCl溶液，在4℃下平衡过夜，得第二混合溶液；

(5)将第二混合溶液在12000r/min条件下离心30min，弃去上清液，洗涤3次，即得sAb/DNA‑AuNPs探针，探针分散于PBS中，并储存于4℃冰箱备用。

5.根据权利要求4所述的方法，其中：

步骤(1)所述透析处理中，每隔4 6h更换一次透析液，透析液更换5 6次。

~ ~

6.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述基于AuNPs的间接竞争酶联免疫吸附的建立包括：(1)包被：用CBS将多菌灵‑BSA稀释32000倍，向96孔酶标板中加入100μL/孔，置于37℃的恒温孵育箱中孵育3h或4℃过夜；

(2)封闭：包被完成的酶标板用PBST洗涤3 5次，拍干后加入300μL/孔的5％脱脂乳粉，~

37℃恒温孵育40min后取出，用PBST洗涤3 5次，拍干后于‑50℃冰箱保存备用；

~

(3)加样：取出封闭好的酶标板，恢复至室温后加入50μL/孔用PBS稀释的mAb和多菌灵标准品，混匀后37℃恒温孵育30min；

(4)加sAb/DNA‑AuNPs探针：将步骤(3)得到的酶标板取出后用PBST洗板3 5次，拍干后~加入PBS和sAb/ALP‑AuNPs探针，混匀后37℃恒温孵育30min；

(5)TdT反应：将步骤(4)得到的酶标板取出后用PBST洗板3 5次，拍干后向其中加入~

0.3μL TdT，1.2μL biotin‑16‑dCTP，98.5μL TdT反应缓冲液，混匀后在37℃下反应

30min；

(6)SA‑biotin反应：将步骤(5)得到的酶标板取出后用PBST洗板3 5次，拍干后加入1μL ~SA‑ALP和99μL Tris‑HCl缓冲液，在室温下反应10min；

(7)加反应底物：将步骤(6)得到的酶标板取出后用PBST洗板3 5次，拍干后加入100μL、~

60mg/mLG‑1‑P溶液；

(8)测定：将步骤(7)得到的溶液在37℃下反应30min，使用PGM测定其中的葡萄糖含量，记录PGM数值。

7.根据权利要求6所述的方法，其中：

步骤(4)所述PBS加入标准为95μL/孔；所述sAb/ALP‑AuNPs加入标准为6μL/孔。

8.根据权利要求1所述的方法，其中：

所述快速检测包括：

用PBS配置不同浓度的多菌灵标准溶液，将其作为样品加样处理，每个浓度进行3组平行实验，记录不同浓度多菌灵下检测溶液中所呈现出的PGM信号值。

9.根据权利要求8所述的方法，其中：

所述不同浓度的多菌灵标准溶液包括：

浓度分别为0、0.13、0.41、1.23、3.70、11.1、33.3和100ng/mL的多菌灵标准溶液。