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专利号: 2022107512109
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,包括:在CpG甲基转移酶M.SssI和腺嘌呤甲基转移酶Dam MTase存在下,哑铃探针1——DP1分别在胞嘧啶C‑5和腺嘌呤N‑6处甲基化,形成GlaI和DpnI的催化底物;

将GlaI和DpnI同时裂解,产生两种裂解产物CP1和CP2;

所述裂解产物CP1和CP2分别与哑铃探针2——DP2中环的3'端序列杂交,然后作为引物在Bst DNA聚合酶、Nt.BspQI和dNTPs存在下引发双向SDA反应,产生触发器1和2;

所述触发器1和2与DP2茎部的5'端序列杂交,然后作为转录模板在T7 RNA聚合酶和NTPs存在下作为转录模板激活双转录扩增,产生芒果和菠菜适配体;

将所述芒果和菠菜适配体与TO1‑biotin和DFHBI进行结合,产生增强的双色荧光信号,同时检测M.SssI和Dam MTases的活性,即得。

2.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP2的茎由双链区和单链区两部分组成,双链区域包含切割酶的部分识别序列,单链区域包含切割酶的其他部分识别序列、T7启动子序列以及芒果和菠菜适配体的DNA序列。

3.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP1的切割产物与DP2杂交后可以介导双向SDAs,诱导双转录扩增,产生两种发光RNA适配体;

在DP1、DP2‑1和DP2‑2的3'端修饰一个NH2和三个未配对碱基。

4.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,所述DP1中茎包含二核苷酸序列5'‑A‑C‑G‑T‑

3'/3'‑T‑G‑C‑A‑5'和5'‑G‑A‑T‑C‑3'/3'‑C‑T‑A‑G‑5'。

5.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP1的两个环部序列分别与DP2的对应部分的环部序列互补。

6.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP1中茎包含二核苷酸序列5'‑A‑C‑G‑T‑3'/

3'‑T‑G‑C‑A‑5'和5'‑G‑A‑T‑C‑3'/3'‑C‑T‑A‑G‑5'。

7.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,GlaI的催化底物5'‑A‑mC‑G‑T‑3'。

8.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DpnI的催化底物5'‑G‑mA‑T‑C‑3'。

9.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,若样品中缺少M.SssI和Dam MTases,则检测不到TO1‑biotin和DFHBI的荧光信号,反之,则M.SssI和Dam MTases存在。

10.一种甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器,其特征在于,包括:两种哑铃探头DP1和DP2;

其中,DP1中茎包含二核苷酸序列5'‑A‑C‑G‑T‑3'/3'‑T‑G‑C‑A‑5'和5'‑G‑A‑T‑C‑3'/

3'‑C‑T‑A‑G‑5';

DP2的茎由双链区和单链区两部分组成,双链区域包含切割酶的部分识别序列,单链区域包含切割酶的其他部分识别序列、T7启动子序列以及芒果和菠菜适配体的DNA序列;

TO1‑biotin和DFHBI;

Bst DNA聚合酶、Nt.BspQI和dNTPs;

T7 RNA聚合酶和NTPs。