1.一种甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,包括:在CpG甲基转移酶M.SssI和腺嘌呤甲基转移酶Dam MTase存在下,哑铃探针1——DP1分别在胞嘧啶C‑5和腺嘌呤N‑6处甲基化,形成GlaI和DpnI的催化底物;
将GlaI和DpnI同时裂解,产生两种裂解产物CP1和CP2;
所述裂解产物CP1和CP2分别与哑铃探针2——DP2中环的3'端序列杂交,然后作为引物在Bst DNA聚合酶、Nt.BspQI和dNTPs存在下引发双向SDA反应,产生触发器1和2;
所述触发器1和2与DP2茎部的5'端序列杂交,然后作为转录模板在T7 RNA聚合酶和NTPs存在下作为转录模板激活双转录扩增,产生芒果和菠菜适配体;
将所述芒果和菠菜适配体与TO1‑biotin和DFHBI进行结合,产生增强的双色荧光信号,同时检测M.SssI和Dam MTases的活性,即得。
2.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP2的茎由双链区和单链区两部分组成,双链区域包含切割酶的部分识别序列,单链区域包含切割酶的其他部分识别序列、T7启动子序列以及芒果和菠菜适配体的DNA序列。
3.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP1的切割产物与DP2杂交后可以介导双向SDAs,诱导双转录扩增,产生两种发光RNA适配体;
在DP1、DP2‑1和DP2‑2的3'端修饰一个NH2和三个未配对碱基。
4.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,所述DP1中茎包含二核苷酸序列5'‑A‑C‑G‑T‑
3'/3'‑T‑G‑C‑A‑5'和5'‑G‑A‑T‑C‑3'/3'‑C‑T‑A‑G‑5'。
5.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP1的两个环部序列分别与DP2的对应部分的环部序列互补。
6.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DP1中茎包含二核苷酸序列5'‑A‑C‑G‑T‑3'/
3'‑T‑G‑C‑A‑5'和5'‑G‑A‑T‑C‑3'/3'‑C‑T‑A‑G‑5'。
7.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,GlaI的催化底物5'‑A‑mC‑G‑T‑3'。
8.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,DpnI的催化底物5'‑G‑mA‑T‑C‑3'。
9.如权利要求1所述的甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器用于无标记和超灵敏检测多种DNA甲基转移酶的方法,其特征在于,若样品中缺少M.SssI和Dam MTases,则检测不到TO1‑biotin和DFHBI的荧光信号,反之,则M.SssI和Dam MTases存在。
10.一种甲基化驱动构建双色发光RNA纳米传感器,其特征在于,包括:两种哑铃探头DP1和DP2;
其中,DP1中茎包含二核苷酸序列5'‑A‑C‑G‑T‑3'/3'‑T‑G‑C‑A‑5'和5'‑G‑A‑T‑C‑3'/
3'‑C‑T‑A‑G‑5';
DP2的茎由双链区和单链区两部分组成,双链区域包含切割酶的部分识别序列,单链区域包含切割酶的其他部分识别序列、T7启动子序列以及芒果和菠菜适配体的DNA序列;
TO1‑biotin和DFHBI;
Bst DNA聚合酶、Nt.BspQI和dNTPs;
T7 RNA聚合酶和NTPs。