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专利号: 2022104698125
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-21
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一株曲霉(Aspergillus sp.)MNP‑2,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M 2022061,保藏日期2022年1月12日,保藏单位地址为中国武汉,武汉大学,邮编

430072。

2.一种权利要求1所述曲霉MNP‑2在生物发酵合成式(I)所示二苯并氧杂 类化合物中的应用,

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述的应用为:(1)菌株发酵:将曲霉MNP‑2接至大米培养基,搅拌均匀,在室温下避光静置发酵25‑35天,获得发酵混合物;所述大米培养基是由大米和蒸馏水组成;

(2)化合物提取:将步骤(1)制备的发酵混合物加入有机溶剂a中,室温、30‑50kHz超声提取15‑20min,过滤,滤液减压浓缩至无液体流出,得到粗提物浸膏;将全部粗提物浸膏用有机溶剂b溶解后,采用硅胶柱进行分离纯化,分别以体积比1:0、100:1、50:1、20:1、10:1、

4:1、0:1的有机溶剂c:甲醇为洗脱剂,洗脱速度均为50‑60mL/min,洗脱量均为5‑15个柱体积,收集体积比20:1的流出液;将收集的流出液浓缩至无液体流出,取浓缩物用甲醇a溶解后再进行硅胶柱分离纯化,分别以体积比50:1、40:1、20:1的有机溶剂d:甲醇为洗脱剂,洗脱速度均为30‑40mL/min,以体积比10:1的二氯甲烷:甲醇为展开剂进行TLC检测,收集Rf值为0.6的流出液;将流出液加入甲醇b中,室温静置重结晶,过滤,取晶体,40‑50℃干燥3‑5h,获得所述式(I)所示二苯并[b,e]氧杂 类化合物;所述有机溶剂a为甲醇、乙醇、丙酮或乙酸乙酯;所述有机溶剂b同有机溶剂a;所述有机溶剂c为二氯甲烷或氯仿,所述有机溶剂d同有机溶剂c。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于步骤(1)蒸馏水用量以大米质量计为1‑2mL/g。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于步骤(1)所述曲霉MNP‑2发酵前先活化,种子扩大培养,再将种子液以体积浓度0.05mL/g的接种量接种至大米培养基;所述活化和种子扩大培养按如下步骤进行:(1)活化培养:将曲霉MNP‑2接入PDA斜面培养基,28℃培养箱培养

3‑4天,活化菌种;PDA斜面培养基终浓度组成为:葡萄糖20g/L,马铃薯200g/L,琼脂15‑18g/L,溶剂为蒸馏水,pH自然;(2)种子培养:从步骤(1)活化菌落中挑取一接种环菌体接种至PDB种子培养基,在200rpm、28℃条件下摇床培养3天,获得种子液;PDB种子培养基终浓度组成为:马铃薯200g/L,葡萄糖20g/L,溶剂为蒸馏水,pH自然。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于步骤(2)所述有机溶剂a体积用量以发酵混合物质量计为1‑5mL/g;所述有机溶剂b体积用量以发酵混合物质量计为0.01‑1mL/g。