1.一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法,其特征在于包括以下步骤:S1、制备标准溶液和衍生溶液
EGCG标准溶液:精确称取10.0mgEGCG标准品,溶于甲醇并定容至10mL,得到1mg/mL标准储备液,4℃冰箱中避光保存,使用时按比例稀释至所需倍数;
FeCl3衍生溶液:准确称取5g无水三氯化铁标准品,加入100mL无水乙醇,混合均匀后,4℃冰箱中避光保存备用;
S2、制备茶饮样品溶液
取三种茶饮料适量于单独的离心管中,分别过0.45um水系滤膜后得到三种茶饮料样品溶液,在4℃冰箱中冷藏备用;
S3、预洗硅胶板
取硅胶板放于自动展开缸中,之后将10mL色谱级甲醇从仪器上部两侧槽中注入展开缸,以其作为流动相进行展开预洗,展开至硅胶板顶端后取出,最后用加热器在120°C条件下干燥20min,降至室温后,用锡纸包装并保存于密封袋中;
S4、HPTLC色谱展开
采用0.5MPa氮气为载体,用100μL注射器吸取样品溶液,通过ChromaSprayI型点样仪进行精确点样于20cm×10cm的薄层板上,点样的条带长度6mm,条带距离底部10mm,距离左端
25mm,对步骤S1和步骤S2制备的标准溶液1~25μL、三种茶饮料样品溶液分别10 μL进行点样,在每次取样之间,注射器用甲醇和超纯水分别手动清洗三次,全部样品点样结束后用半自动展开缸进行展开,展开前在仪器的两侧槽内分别注入10mL相对应的流动相,展开完成后将硅胶板置于60°加热器上充分干燥5min,以便挥发去除薄层板上残留的有机溶剂;
S5、FeCl3变色反应及色谱结果成像
将完成色谱分离后的硅胶板通过自动浸渍装置浸入FeCl3衍生液中,移动速度3 mm/s,停留时间3 s,然后将蘸有FeCl3衍生液的硅胶板置于薄层色谱加热器上50℃加热,当硅胶板黄棕色背景出现明显的黑色斑点后,使用配备佳能EOS 700D相机的成像系统对衍生后的硅胶板进行成像记录;
S6、分析
使用ImageJ软件中像素灰度转化‑积分功能对数字化图像进行模拟扫描定量分析。
2.根据权利要求1所述的一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法,其特征在于步骤S4中展开采用以下具体参数,流动相中氯仿:丙酮:甲酸的体积比为12.5:7.5:2.2;湿度控制3min,预平衡5 min,上行展开距离80 mm。
3.根据权利要求1所述的一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法,其特征在于步骤S6的具体操作如下,首先将目标条带区域裁剪并保存为PC兼容格式,然后应用ImageJ软件中的“Image‑Color‑Split Channels”功能,将原始图片拆分为三个颜色通道,选出最佳颜色通道后,将该通道下裁剪好的目标区域,使用“Analyze‑Gels”功能定义一个覆盖目标条带起始线和结束线的矩形,然后提取这些矩形在垂直方向上的像素灰度值,并使用“Plot Lanes”功能进行轮廓分析,然后将图形结果转换为可积分色谱图;最后通过“Straight option”选项绘制基线,使用积分工具“Wand tool”定义色谱图中峰的峰面积,所获取的数据峰面积可直接用于定量分析。
4.根据权利要求3所述的一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法,其特征在于所述PC兼容格式为tif文件。
5.根据权利要求3所述的一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法,其特征在于所述三个颜色通道分别为Blu通道、Red通道、Green通道。
6.根据权利要求3所述的一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法,其特征在于步骤S3中所述硅胶板的尺寸为10cm×20cm。
7.根据权利要求3所述的一种HPTLC图像分析快速定量茶中茶多酚的方法,其特征在于步骤S4中将1~25μL标准溶液和10μL样品溶液,以100nL/s的速度和0.2μL的预排体积进行喷涂于硅胶板上。