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专利号: 202210374158X
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶,其特征在于:氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因,其特征在于:核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组表达载体。

5.如权利要求4所述的重组表达载体,其特征在于:是将核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶编码基因克隆入原核表达载体pⅡSA的zSUMO标签序列与eGFP标签序列之间而得到。

6.含有权利要求4或5所述重组表达载体的工程菌。

7.如权利要求6所述的工程菌,其特征在于,是将所述重组表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中而得到。

8.利用权利要求7所述工程菌制备肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:将所述工程菌接种于含有氨苄青霉素即Amp的LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜,次日取菌悬液按体积比1:100接入含Amp的LB液体培养基中,37℃振荡培养至OD600=

0.6,加入IPTG至终浓度为0.5mM,16℃振荡诱导培养16h,4℃离心收集菌体,用pH8.0 PBS缓冲液重悬,加入蛋白酶抑制剂PMSF至终浓度为1mM,冰浴条件下超声波间歇破碎菌体,4℃离心,上清液用孔径0.45μm的过滤器过滤,滤液于4℃条件下以流速1mL/min上Ni‑TED柱,用

500mM咪唑溶液按1%~100%浓度配比进行梯度洗脱,收集洗脱液,于4℃条件下用pH7.4 PBS缓冲液透析,即得肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶,加入甘油至终浓度为20%,‑20℃保存。

9.权利要求1所述肺炎克雷伯菌噬菌体裂解酶在制备抗革兰氏阴性菌的药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述抗革兰氏阴性菌的药物可在无外膜渗透剂条件下单独发挥抗革兰氏阴性菌的作用。