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专利号: 202210230611X
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高丰度DNJ桑树毛根材料的制备方法,其特征在于:所述高丰度DNJ桑树毛根材料中过表达MnGutB1,所述基因MnGutB1的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示;

所述方法包括:1)将构建好的植物过表达载体pZYGC- MnGutB1转入发根农杆菌 K599,采用针刺法,注射菌液至四叶期桑苗的子叶节处诱导产生转化毛状根;

2)筛选出特异激发绿色荧光的转基因阳性发根;

3)收获阳性株系发根,抽提所取材料的总RNA,反转录合成cDNA,分别采用MnGutB1基因特异引物进行RT-PCR检测,以MnRPL15作为内参基因;引物序列为:5'-GGCTATGTGATTTACCGTGTT-3',5'- TTGGTCCAGTATGAGTTGAGAA-3',反应条件为:94 ℃预变性4 min;94 ℃变性15 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共24个循环;最后72 ℃延伸10min;筛选步骤2)中转基因阳性发根中MnGutB1基因表达水平相对空载转化显著提升;

4)通过HPLC-MS/MS进一步验证步骤3)获得的转基因阳性发根中DNJ的含量相对空载转化显著提升,获得高丰度DNJ的桑树毛根材料。

2.根据权利要求1所述高丰度DNJ桑树毛根材料的制备方法,其特征在于:所述植物过表达载体pZYGC- MnGutB1为包含MnGutB1部分特异性序列的pZYGC植物过表达载体,扩增所述MnGutB1部分特异性序列的引物序列为:F:5’- atttcatttggagaggacagATGGCAAAATCACCAGAAGA-3’;

R:5’- tcctccaccggttctagaatgcatCTGTGATAAAGAGTTCCCCAC-3’;其中,小写字母为载体同源臂。