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专利号: 2022101350577
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.可逆结合生物素的链霉亲和素突变蛋白,其特征在于:所述突变蛋白为野生型链霉亲和素第44至47位氨基酸残基为VTAR,以及链霉亲和素的第27位或第120位突变,27位的丝氨酸突变为苏氨酸记为S27T,120位的色氨酸突变为组氨酸记为W120H;所述突变蛋白的氨基酸序列如下:S27T氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示;

W120H氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.含有权利要求1所述可逆结合生物素的链霉亲和素突变蛋白与微球的固定复合物。

3.权利要求1所述链霉亲和素突变蛋白或权利要求2所述固定复合物在纯化Strep tag Ⅱ标签或Twinstrep标签蛋白中的应用。

4.权利要求1所述链霉亲和素突变蛋白或权利要求2所述固定复合物在纯化生物素修饰蛋白中的应用。

5.利用权利要求1所述可逆结合生物素的链霉亲和素突变蛋白纯化Strep tag Ⅱ标签或Twinstrep标签蛋白的方法,其特征在于:将表达含Strep tag Ⅱ标签或Twinstrep标签蛋白的裂解液与含所述链霉亲和素突变蛋白的固定复合物结合,缓冲液冲洗,最后用5‑10 mM Biotin缓冲液洗脱,收集洗脱液。

6.根据权利要求5所述可逆结合生物素的链霉亲和素突变蛋白纯化Strep tag Ⅱ标签或Twinstrep标签蛋白的方法,其特征在于:Biotin缓冲液洗脱后还包括再生利用,具体为:向纯化过 Strep tag Ⅱ标签或Twinstrep标签蛋白的固定复合物加入缓冲液洗涤即可再次使用。

7.利用权利要求1所述可逆结合生物素的链霉亲和素突变蛋白纯化生物素修饰蛋白的方法,其特征在于:将含所述链霉亲和素突变蛋白的固定复合物平衡后,与含生物素修饰蛋白的裂解液结合,缓冲液冲洗,最后用10‑50 mM Biotin缓冲液洗脱,收集洗脱液。

8.根据权利要求7所述可逆结合生物素的链霉亲和素突变蛋白纯化生物素修饰蛋白的方法,其特征在于:所述Biotin缓冲液洗脱后还包括再生利用,具体为:向纯化过生物素修饰蛋白的固定复合物加入缓冲液洗涤即可再次使用。