1.一种基于酶DNA修复级联驱动荧光团编码/去编码的生物传感器,其特征在于,所述生物传感器至少包括AP探针,TS引物,无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶,荧光基团修饰的dATP,末端脱氧核苷酸转移酶以及链霉亲和素包被的磁珠;
其中,所述AP探针为一个单链的DNA,所述AP探针含有无嘌呤/无嘧啶位点;且所述AP探针可以与端粒酶延伸产物完全杂交形成包含AP位点的双链DNA,而与未能发生反应的TS引物只会部分杂交。
2.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述AP探针5'末端和3'末端分别修饰有生物素和磷酸基团;
优选的,所述AP探针长度为30nt,所述AP探针的碱基序列为:5'‑Biotin‑CCTCCC TAAXCC TAA CTC TGC TCG ACG GAT‑PO4‑3',其中下划线标出的碱基序列即为磁珠捕获的后续进行TdT扩增的序列,下划线标出的X即无嘌呤/无嘧啶位点。
3.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述荧光基团修饰的dATP中,所述荧光基团为Cy5;
优选的,所述Cy5 dATPs在总dATPs中占比少于50%,进一步少于30%,优选为20%。
4.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述生物传感器还包括核酸外切酶,优选为核酸外切酶I。
5.权利要求1‑4任一项所述生物传感器在检测端粒酶中的应用。
6.一种检测端粒酶的方法,其特征在于,所述方法包括采用权利要求1‑4任一项所述生物传感器进行检测。
7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述方法包括:S1、将待测样品加入反应溶液I中,进行端粒酶延伸以及酶切反应,然后高温灭活处理并进行磁珠捕获,构建MB单链DNA纳米结构;
S2、向步骤S1制得的MB单链DNA纳米结构中加入TdT酶,dATPs和荧光基团修饰的dATP,进行延伸反应,得到荧光基团标记的多尾单链DNA链;
S3、向步骤S2中荧光基团标记的多尾单链DNA链中加入核酸外切酶进行反应;
优选的,所述步骤S1中,反应溶液I中至少包括TS引物、APE1酶和AP探针;
进一步优选的,所述反应溶液I中还可以包括dNTPs、RNA酶抑制剂以及反应buffer等,从而有助于反应的顺利进行;
优选的,端粒酶延伸以及酶切反应具体反应条件为:在30‑45℃(优选为37℃),反应30‑
60min(优选为30min);高温灭活的温度为60℃以上,优选为65℃;
‑1
优选的,所述磁珠为链霉亲和素包被的磁珠,磁珠使用浓度控制为1‑10mg mL ,优选为‑1
5mg mL ;
优选的,所述步骤S2中,延伸反应具体条件为:在30‑45℃(优选为37℃),反应0.5‑2h(优选为1h);
优选的,所述步骤S3中,反应具体条件为:在30‑45℃(优选为37℃),反应10‑60min(优选为15min);
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述方法还包括对步骤S3获得的反应产物进行检测分析;优选的,所述检测分析包括荧光检测分析和单分子成像检测分析。
优选的,待测样品是生物样品,所述生物样品包括离体的血液、体液、组织和细胞。
9.权利要求1‑4任一项所述生物传感器和/或权利要求6‑8任一项所述检测方法在端粒酶相关药物筛选和/或生物样品端粒酶检测分析中的应用。
10.如权利要求9所述应用,其特征在于,所述端粒酶相关药物包括端粒酶促进剂和端粒酶抑制剂;
所述生物样品包括离体的血液、体液、组织和细胞。