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专利号: 2022100109193
申请人: 齐鲁工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-30
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WTF1,于2021年7月9日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址:中国武汉武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M2021847。

2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌的16sDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;

优选的,所述解淀粉芽孢杆菌具有5‑羟甲基糠醛耐受性,在培养基中培养时5‑羟甲基糠醛的耐受浓度范围为0‑20mM。

3.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌的培养方法,其特征在于,包括步骤:挑取解淀粉芽孢杆菌在固体种子培养基上划线,于25‑37℃培养20‑30h后,挑取单菌落转接入种子培养基中,在25‑37℃、180‑220rpm下培养10‑20h;以0.5‑2%的接种量转接入发酵培养基中,于25‑37℃、180‑220rpm条件下培养10‑20h,即得解淀粉芽孢杆菌菌液。

4.如权利要求3所述的培养方法,其特征在于,所述发酵培养基或种子培养基的组分为:胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,氯化钠10g/L;固体培养基再添加2%琼脂。

5.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在制备2,5‑呋喃二甲酸的应用。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于,所述应用是以5‑羟甲基糠醛为底物,采用解淀粉芽孢杆菌全细胞转化生产2,5‑呋喃二甲酸。

7.一种应用权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌以5‑羟甲基糠醛为底物,全细胞转化生产2,5‑呋喃二甲酸的方法,包括步骤:在OD600为50‑120的解淀粉芽孢杆菌菌悬液中添加5‑羟甲基糠醛,5‑羟甲基糠醛的终浓度为30‑125mM,在25‑37℃、180‑220rpm下转化生产50‑100h,即得含有2,5‑呋喃二甲酸的转化液。

8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌菌悬液是将解淀粉芽孢杆菌菌体用pH6‑8的缓冲液重悬后得到的;

进一步优选的,所述解淀粉芽孢杆菌菌体是按照权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌的培养方法培养后离心得到的;或者是将解淀粉芽孢杆菌于25‑37℃、180‑220rpm条件下在发酵培养基中培养12‑18h后离心得到的;

进一步优选的,所述缓冲液的pH为7;

进一步优选的,所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。

9.如权利要求7所述的方法,其特征在于,满足以下条件之一项或多项:i.所述解淀粉芽孢杆菌菌悬液的OD600为90‑110;

ii.所述5‑羟甲基糠醛的终浓度为50‑125mM;

iii.所述转化生产的温度为28‑32℃;

iv.所述转化生产的转速为190‑210rpm;

v.所述转化生产的时间为72‑96h。

10.如权利要求7所述的方法,其特征在于,具体包括步骤:挑取解淀粉芽孢杆菌在固体种子培养基上划线,于25‑37℃培养20‑30h后,挑取单菌落转接入种子培养基中,在25‑37℃、180‑220rpm下培养10‑20h;以0.5‑2%的接种量转接入发酵培养基中,于25‑37℃、180‑220rpm条件下培养10‑20h,得解淀粉芽孢杆菌菌液,离心得菌体,用pH6‑8的缓冲液洗涤后重悬菌体,使菌体最终浓度OD600为50‑120,然后加入5‑羟甲基糠醛,使5‑羟甲基糠醛的终浓度为30‑125mM,于25‑37℃、180‑220rpm条件下转化生产50‑

100h,即得含有2,5‑呋喃二甲酸的转化液;

或者,将解淀粉芽孢杆菌于25‑37℃、180‑220rpm条件下的菌体培养基中培养12‑18h,离心得菌体,用pH6‑8的缓冲液洗涤后重悬菌体,使菌体最终浓度OD600为50‑120,然后加入

5‑羟甲基糠醛,使5‑羟甲基糠醛的终浓度为30‑125mM,于25‑37℃、180‑220rpm条件下转化生产50‑100h,即得含有2,5‑呋喃二甲酸的培养液;

进一步优选的,所述用pH6‑8的缓冲液洗涤后重悬菌体是用缓冲液洗涤2次菌体后再进行重悬。