1.一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于该荧光微球的制备方法为:制备一种具有超大孔径的树枝状二氧化硅模板,其表面修饰接枝巯基基团得到巯基化树枝状二氧化硅dSiO2‑SH模板,随后以巯基化树枝状二氧化硅dSiO2‑SH模板为起始材料,以油酸修饰的CdSe/CdS/ZnS量子点QDs为待组装的油相量子点,利用dSiO2‑SH模板上巯基与量子点中金属的配位作用负载油相量子点,实现油相量子点的第一层组装,之后利用树枝状聚酰胺胺聚合物分子的配位连接作用继续组装油相量子点,获得三层及以上量子点组装且最外层为量子点的dSiO2/QDs微球组装体,随后通过正辛基三甲氧基硅烷OTMS在dSiO2/QDs微球组装体表面发生水解缩合反应,实现dSiO2/QDs微球组装体由表面疏水性向表面亲水性转变,接着通过正硅酸乙酯TEOS在其表面水解生长二氧化硅壳层,然后依次经氨丙基三乙氧基硅烷进行氨基化修饰和琥珀酸酐进行羧基化修饰,即制备完成;
其中,所述三层及以上量子点组装且最外层为量子点的dSiO2/QDs微球组装体的制备包括以下步骤:步骤A:将巯基化树枝状二氧化硅dSiO2‑SH模板,加入至含有油酸修饰的CdSe/CdS/ZnS量子点QDs的甲苯溶液中,超声5‑10min,之后离心除去上清,洗涤除去多余QDs,得到一层量子点组装的dSiO2/QDs微球组装体;
步骤B:将步骤A所得组装体加入至含有过量PAMAM的乙醇溶液中,超声5‑20min后,离心除去上清,洗涤除去多余PAMAM,得到经PAMAM修饰后的组装体;
步骤C:以步骤B所得PAMAM修饰的组装体为原料,重复上述步骤A的操作,即可在组装体上再次组装一层量子点;按照此方法,制备三层及以上量子点组装且最外层为量子点的dSiO2/QDs微球组装体。
2.如权利要求1所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于所述超大孔径的树枝状二氧化硅模板的制备方法为:以十六烷基三甲基溴化铵为模板,水杨酸钠为结构导向剂,三乙醇胺作为催化剂,以水为溶剂,于70‑90℃下搅拌反应0.5 2h后,~加入硅源硅酸四乙酯,继续搅拌反应2 5h,即制得所述超大孔径的树枝状二氧化硅模板。
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3.如权利要求2所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于制备超大孔径的树枝状二氧化硅模板的过程中,所述十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠和三乙醇胺的质量比为1:0.6 0.9:0.1 0.3;所述十六烷基三甲基溴化铵质量与硅酸四乙酯~ ~体积之比为(0.06 0.1)g : 1mL。
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4.如权利要求3所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于所述十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠和三乙醇胺的质量比为1:0.7 0.8:0.18 0.22。
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5.如权利要求1所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于该荧光微球的具体制备方法为,包括以下步骤:
1)正辛基三甲氧基硅烷修饰的dSiO2/QDs的制备
步骤S1:向dSiO2/QDs微球组装体中加入正辛基三甲氧基硅烷OTMS,超声混匀后加入甲醇和氨水,超声混合20‑60min实现微球组装体从油相转移至水相,离心后除去上清液,用甲醇洗涤一次除去多余的OTMS;
步骤S2:进一步在沉淀中加入超纯水和氨水,室温下搅拌反应15‑20h,反应结束用乙醇洗涤数次并最终分散至乙醇中,获得表面有机硅烷修饰的SQ‑OTMS产物的分散液;
2)表面生长二氧化硅壳层的微球组装体的制备
向步骤1)所得表面有机硅烷修饰的SQ‑OTMS产物的分散液中,加入超纯水和氨水,搅拌下加入硅酸四乙酯,使得在SQ‑OTMS上生长二氧化硅壳,反应结束后将产物离心,并用乙醇洗涤数次,得到巯基化树枝状二氧化硅/量子点/二氧化硅微球,将其标记为SQS;
3)氨基‑羧基化SQS微球的制备
将步骤2)所得SQS微球分散于乙醇溶剂中,随后加入氨水和氨丙基三乙氧基硅烷,搅拌反应10‑15h后,将其离心用乙醇纯化,得到氨基修饰的SQS微球,然后加入至含有琥珀酸酐的有机溶液中,并反应3‑5h,离心并乙醇和水洗涤数次后,得到基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,即制备完成。
6.如权利要求1所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于dSiO2‑SH模板上总计组装三层QDs量子点,第一层量子点的投料质量是dSiO2‑SH模板质量的
40~220%;第二层量子点的投料质量是dSiO2‑SH模板质量的40~180%;第三层量子点的投料质量是dSiO2‑SH模板质量的40~160%。
7.如权利要求6所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于dSiO2‑SH模板上总计组装三层QDs量子点,第一层量子点的投料质量是dSiO2‑SH模板质量的
200%;第二层量子点的投料质量是dSiO2‑SH模板质量的160%;第三层量子点的投料质量是dSiO2‑SH模板质量的140%。
8.如权利要求5所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于步骤1)中正辛基三甲氧基硅烷OTMS的体积与dSiO2‑SH模板的质量之比为(15~25)ul :
1mg;步骤1)的步骤S1中,正辛基三甲氧基硅烷OTMS、甲醇和氨水的体积之比是1:100 200:2~
4;步骤1)的步骤S1中正辛基三甲氧基硅烷OTMS与步骤S2中氨水体积之比是1:2 4,氨水质~ ~量浓度是25 30%。
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9.如权利要求5所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于步骤2)中,硅酸四乙酯与氨水的体积比为1:3 5,氨水质量浓度是25 30%;步骤2)中硅酸四~ ~乙酯体积与dSiO2‑SH模板的质量之比为(10~20)ul : 1mg。
10.如权利要求5所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球,其特征在于步骤3)中氨丙基三乙氧基硅烷的体积与dSiO2‑SH模板的质量之比为(3~5)ul : 1mg,步骤
3)中氨丙基三乙氧基硅烷与氨水的体积之比为0.03 0.05:1,氨水质量浓度是25 30%;步骤~ ~
3)中琥珀酸酐与dSiO2‑SH模板的质量之比为8~12:1。
11.一种SARS‑CoV‑2抗原免疫层析快速检测分析的方法,其特征在于包括以下步骤:
1)SQS荧光探针的制备:将权利要求1所述的一种基于量子点逐层亲和组装的高亮度荧光微球分散于PB 缓冲液中,加入EDC和Sulfo‑NHS并搅拌反应20‑40min,以活化缓冲液中的羧基化SQS微球表面羧基;将活化的微球离心弃去上清并分散于PB缓冲液中,然后加入SARS‑CoV‑2 S1蛋白单克隆抗体,于室温下反应2 3h,再加入乙醇胺封闭1 3h;反应结束后,~ ~将产物用PB缓冲液洗涤数次,即得SQS荧光探针;
2)检测试纸条的制备:将SQS荧光探针溶于PB缓冲溶液中,并均匀喷涂在结合垫上,干燥;将SARS‑CoV‑2 S1蛋白单克隆抗体和羊抗鼠抗体分别固定在NC膜的T线和C线上,然后干燥;最后将吸水纸、NC膜、结合垫和样品垫依次组装,切割形成免疫层析试纸,备用;
3)标准曲线的绘制:将一系列不同浓度的含SARS‑CoV‑2 S1 RBD蛋白的溶液,分别滴加到免疫层析试纸的样品垫上,溶液在毛细作用下逐渐向免疫层析试纸的NC膜上层析,20‑
30min后,拍摄NC膜上T线的照片,T线区上显示红色信号,用颜色识别软件读取T线RGB值获得T线区的红色信号强度R值,以该红色信号R值为纵坐标、新冠S1蛋白的浓度为横坐标绘制标准曲线,计算线性回归方程;
4)实际样品的检测:将含有样品的溶液滴加到免疫层析试纸的样品垫上,溶液在毛细作用下逐渐向免疫层析试纸的NC膜上层析,20‑30min后,拍摄NC膜上T线的照片,T线区上显示红色信号,用颜色识别软件读取T线RGB值获得T线区的红色信号强度R值,代入步骤3)所得线性回归方程,即可推断出样品中的SARS‑CoV‑2 S1 RBD蛋白含量。