1.一种高通量测定柑橘溃疡病杀菌剂活性的方法,包括以下步骤:将待测杀菌剂分别与重组型和野生型柑橘溃疡病菌菌液共孵育,测定共孵育体系荧光强度,分别得到Ra和Rb;
将空白对照分别与重组型和野生型柑橘溃疡病菌菌液共孵育,测定共孵育体系荧光强度,分别得到Rc和Rd;
根据式I所示公式计算抑制率,所述抑菌率用于表征杀菌剂的活性;
所述Ra为待测杀菌剂与重组型柑橘溃疡病菌菌液共孵育体系的荧光强度;所述Rb为待测杀菌剂与野生型柑橘溃疡菌共孵育体系的荧光强度;所述Rc为空白对照组与重组型柑橘溃疡病菌共孵育体系的荧光强度;所述Rd为空白对照组与野生型柑橘溃疡病菌共孵育体系的荧光强度;
抑制率(%)=(Ra‑Rb)/(Rc‑Rd)×100% 式I;
所述重组柑橘溃疡病菌包含重组质粒;所述重组质粒上插入有可示踪的荧光蛋白标签的编码基因;
测定所述共孵育体系荧光强度的激发波长和发射波长与所述可示踪的荧光蛋白标签相适应。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,计算得到抑制率后,还包括:以抑制率为Y轴,以杀菌剂的浓度为X轴,构建得到剂量反应曲线,根据所述剂量反应曲线计算最低抑菌浓度。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述可示踪的荧光蛋白标签包括eYFP、YFP或GFP。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述重组质粒的骨架质粒包括广宿主蛋白表达PBBR1‑MCS系列载体。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述重组柑橘溃疡病菌菌液中重组柑橘溃
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疡病菌的有效活菌数为1×10~1×10cfu/ml。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述共孵育的时间为6h;所述共孵育的温度为28℃。
7.权利要求1~6任意一项所述的方法在筛选柑橘溃疡病杀菌剂中的应用。