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专利号: 2021114409023
申请人: 淮阴工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)对枯草芽孢杆菌进行发酵培养,发酵液离心去除菌体,取其上清液,调节pH值至强酸性使其产生沉淀;

(2)对沉淀进行浸提,收集浸提液,调节pH至中性,搅拌;

(3)对浸提液进行离心,去除沉淀物,收集上清液,即得Subtilosin A的粗提液;

(4)通过固相萃取柱对步骤(3)的Subtilosin A的粗提液进行分离纯化,得到分离纯化之后的Subtilosin A提取液;

(5)称取蒲公英根干粉,加入水搅拌混合均匀,之后用超声波浸提,结束后冷却至室温;

离心后用真空抽滤,收集滤液,得到蒲公英根多糖粗提液;

(6)将蒲公英根多糖粗提液用离子交换柱层析,收集流出液,再将流出液用凝胶柱进行纯化,得到纯化后的蒲公英根多糖提取液;

(7)将步骤(4)收集的Subtilosin A提取液和步骤(6)蒲公英多糖溶液将易挥发的溶剂蒸发干,之后将这两种溶液按体积比为1:1‑10混合,将其制成复合颗粒,得到最终的复合免疫颗粒剂。

2.根据权利要求1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,步骤(1)中枯草芽孢杆菌优选为枯草芽孢杆菌JCL16。

3.根据权利要求1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,步骤(1)中枯草芽孢杆菌进行发酵培养为从固体培养基中挑取单一的枯草芽孢杆菌JCL16菌落,接种到种子培养基中培养16‑18h,转速为180‑200r/min,温度为35‑37℃,之后将种子液按体积比为5%‑10%接种到到发酵培养基中培养24‑48h,温度为35℃‑43℃,转速为160r/min‑240r/min得到发酵培养基。

4.根据权利要1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,步骤(1)中用HCl调节pH值为2‑3,静至过夜,使其产生沉淀。

5.根据权利要1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,步骤(2)中用甲醇对沉淀进行浸提,收集甲醇浸提液,再用NaOH溶液将甲醇浸提液的PH值调节至7.0进行搅拌。

6.根据权利要1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,步骤(4)中通过C18固相萃取柱对步骤(3)的Subtilosin A的粗提液进行分离纯化,分别用3倍柱体积30%,50%,70%,100%的甲醇水溶液梯度洗脱,收集100%甲醇水洗脱的流出液,即可得到分离纯化之后的Subtilosin A提取液。

7.根据权利要1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,步骤(5)中蒲公英根干粉和水比为1:10‑50g/mL,所述的超声波浸提中的超声时间为0.5‑2.5h,温度为50‑90℃,超声功率为60‑140W。

8.根据权利要1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法,其特征在于,步骤(6)中将蒲公英根多糖粗提液用DEAE‑52离子交换柱层析,打开恒流泵以

0.6‑1ml/min的流速进行上样,之后用0.1‑0.5mol/LNaCl溶液进行洗脱,洗脱速度为0.6‑

1ml/min,收集流出液,再将流出液用葡萄糖凝胶柱SephadexG‑100进行纯化每次上样量为

1.5ml,洗脱液为0.1‑0.5mol/LNaCl溶液,以0.6‑1ml/min流速洗脱,最终得到纯化后的蒲公英根多糖提取液。

9.一种权利要1所述的由Subtilosin A与蒲公英根多糖制备复合免疫增强剂的方法所制备的免疫增强剂。

10.一种权利要求9所述的免疫增强剂在制备动物饲料中的应用。