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专利号: 2021113913592
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)DNA折纸结构的制备:将合成DNA折纸所需的DNA短链等量混匀,混合物经过退火自组装形成DNA纳米结构,反应结束后使用超滤管去除未结合的DNA短链,得到纯化的DNA折纸结构;当制备的DNA折纸结构为边长6nm的DNA 四面体时所需的DNA短链分别为6‑1、6‑2、6‑3和6‑4,序列如Seq . No1至4所示;当制备的DNA折纸结构为边长10nm的DNA 四面体时所需的DNA短链分别为10‑1、10‑2、10‑3和10‑4,序列如Seq  . No5至8所示;当制备的DNA折纸结构为边长13nm的DNA 四面体时所需的DNA短链分别为13‑1、13‑2、13‑3、13‑4、13‑5、13‑6、

13‑7和13‑8,序列如Seq . No9至16所示;

(2)DNA锚链与番茄红素合成途径中关键酶的结合:番茄红素合成关键酶分别为牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶、八氢番茄红素合成酶和八氢番茄红素脱氢酶,将这三个关键酶分别与SPDP以一定比例混合,于黑暗条件下孵育,利用超滤管除去过量的SPDP,随后SPDP修饰的关键酶分别与经过预处理的巯基修饰的DNA锚链ML1、ML2、ML3和ML4以一定比例混匀,于黑暗条件下孵育,反应结束后超滤除去过量的锚链DNA,得到结合了DNA锚链的级联酶复合物;与关键酶结合的DNA锚链ML1、ML2、ML3和ML4序列如Seq . No17至20所示;

(3)结合了DNA锚链的关键酶与DNA折纸结构的组装:结合了DNA链的级联酶复合物与DNA折纸以一定比例混匀,然后在PCR仪中退火组装,结束后用超滤管除去过量的游离酶,得到组装了番茄红素关键酶的DNA折纸结构。

2.根据权利要求1所述利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法,其特征在于,所述的DNA折纸结构是边长为6nm、10nm和13nm的3种不同尺寸的四面体。

3.根据权利要求1所述利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法,其特征在于,所述的DNA短链浓度为0.5‑1μM。

4.根据权利要求3所述利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法,其特征在于,所述的DNA短链浓度为1μM。

5.根据权利要求1所述利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法,其特征在于,SPDP修饰关键酶时SPDP以2‑20倍摩尔过量;巯基修饰的DNA锚链ML1、ML2、ML3和ML4分别以

5‑15倍摩尔过量与SPDP修饰的级联酶反应。

6.根据权利要求5所述利用DNA折纸技术组装番茄红素合成途径的方法,其特征在于,SPDP修饰关键酶时SPDP以10倍过量;巯基修饰的DNA锚链ML1、ML2、ML3和ML4分别以10倍摩尔过量与SPDP修饰的级联酶反应。

7.根据权利要求1中所述组装番茄红素合成途径的DNA折纸结构,其特征在于,所述DNA折纸结构在体外反应体系中混合,再于一定温度下反应制备番茄红素。