1.一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,包括以下:步骤a,取一次使用量的待测样品,取出内容物,研磨成粉状,置于容器内,加入纯净水和硫酸镁,振荡混合后,静置,过微孔滤膜过滤,将滤液转移至离心管中,得到第一样液;
步骤b,固相萃取:使用活化剂对C18固相萃取小柱进行活化处理,取所述第一样液负压上样,依次使用水、第一淋洗液进行负压淋洗,采用洗脱液进行负压洗脱,得到第二样液,将第二样液氮气吹干,得到第一待测物,所述活化剂和第一淋洗液均为体积分数为20%的甲醇水溶液,所述洗脱液为体积分数为90%的甲醇水溶液;
步骤c,向所述第一待测物中加入一定量的已烷,待所述第一待测物充分复溶后再次加入己烷补充溶液体积至2ml,混摇3~4次,得到第一复溶样液,向所述第一复溶样液中加入盐酸溶液,混合均匀,在一定温度条件下水浴反应,反应完毕后,取出冷却至室温,得到第三样液,将所述第三样液吹干,得到第二待测物;
步骤d,向所述第二待测物中加入干燥的四氢呋喃溶液,复溶所述第二待测物后,加入对甲基苯异氰酸酯,在120℃油浴条件下加热10min,后降至80℃加热20min,得到第四样液;
步骤e,将所述第四样液转移至旋转蒸发器中蒸干,得到第三待测物,加入醇类溶液复溶所述第三待测物,得到待测样液;
步骤f,取纯净水作为空白对照液,取所述待测样液、空白对照液分别与乙酰胆碱酯酶农残检测试剂反应,利用分光光度计在412nm波长条件下测定反应后的待测样液、空白对照液的分光光度值,并计算所述待测样液对乙酰胆碱酯酶的抑制率;
步骤g,待测样液对乙酰胆碱酯酶的抑制率大于等于50%,判定为阳性,即待测样品中非法添加有奥利司他药物成分;待测样液对乙酰胆碱酯酶的抑制率小于50%,判定为阴性,即待测样品中没有添加奥利司他药物成分。
2.根据权利要求1所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述待测样品为固体减肥保健品或半固体减肥保健品。
3.根据权利要求1所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述待测样品为减肥茶或减肥胶囊中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述步骤a中微孔滤膜的孔径为0.45μm。
5.根据权利要求1所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述步骤b中C18固相萃取小柱的填料粒径为40~60μm,所述C18固相萃取小柱的孔径为120A,所述C18固相萃取小柱的规格为600mg/3ml。
6.根据权利要求1所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述步骤b中上样流速为1.0ml/min,所述第一淋洗液的淋洗流速为1.0ml/min,所述洗脱液的洗脱流速为1.0-1.5 ml/min。
7.根据权利要求1所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述步骤c中盐酸溶液的摩尔浓度为1.0-1.5mol/L,所述步骤c中水浴反应的温度为85℃。
8.根据权利要求1所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述乙酰胆碱酯酶农残检测试剂包括乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和缓冲液,所述乙酰胆碱酯酶农残检测试剂为购买的乙酰胆碱酯酶农残检测试剂或自配的乙酰胆碱酯酶农残检测试剂。
9.根据权利要求8所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述自配的乙酰胆碱酯酶农残检测试剂中底物为碘化乙酰硫代胆碱,所述自配的乙酰胆碱酯酶农残检测试剂中显色剂为二硫代二硝基苯甲酸和碳酸氢钠的混合物,所述自配的乙酰胆碱酯酶农残检测试剂中缓冲液为pH=8的磷酸盐缓冲液。
10.根据权利要求9所述的一种中药类减肥保健品中非法添加奥利司他药物成分的检测方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液由磷酸氢二钾和磷酸二氢钾以11.9:3.2的质量比混合,并定容至1L。