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专利号: 2021113152178
申请人: 商丘师范学院
专利类型:发明专利
专利状态:授权未缴费
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-10-29
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测胰岛素的电化学适配体传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:(1)AuNPs‑Apt探针的制备:将HAuCl4水溶液在搅拌下加热至沸腾,然后加入柠檬酸钠溶液,回流煮沸,将所得AuNPs溶液冷却至室温,然后再加入Apt溶液,低温孵育,得到AuNPs‑Apt探针溶液;

(2)AuNPs修饰电极的制备:将电极依次进行抛光,打磨,清洗并干燥后,用HAuCl4水溶液通过it法制备电极/AuNPs;

(3)电化学适配体传感器的制备:将Apt溶液滴在电极/AuNPs上,用封闭液孵育,得到电极/AuNPs‑Apt。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中Apt的序列为5’‑SH‑GGT GGT GGG GGG GGT TGG TAG GGT GTC TTC‑3’,HAuCl4水溶液的质量体积比浓度为

0.01%‑0.02%,柠檬酸钠溶液的质量体积比浓度为2%‑8%,HAuCl4水溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为(50‑100):1,煮沸时间为15‑20min,AuNPs溶液与Apt溶液的体积比为(1‑2):

19,其中Apt溶液的浓度为50‑100μM,孵育温度为2‑8℃,孵育时间为16‑24h。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中电极为激光打印石墨烯电极或玻碳电极,抛光粉为Al2O3抛光粉,Al2O3抛光粉粒径为0.3、0.05μm,HAuCl4水溶液浓度为35‑45mM,it法的电位为‑0.18‑‑0.22V,时间为160‑200s。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)中Apt溶液浓度为4‑6μM,电极为激光打印石墨烯电极或玻碳电极,激光打印石墨烯电极封闭液为牛血清白蛋白溶液,玻碳电极封闭液为巯基己醇溶液,其中牛血清白蛋白溶液的质量体积比浓度为1%‑

2%,巯基己醇溶液的浓度为8‑10mM。

5.权利要求1所述的方法制备的检测胰岛素的电化学适配体传感器,其特征在于:包括用于特异性识别胰岛素的适配体Apt、水解电极表面未与胰岛素结合的多余Apt的核酸外切酶Ⅰ、金纳米颗粒标记的探针溶液AuNPs‑Apt、AuNPs修饰的电极;其中Apt通过Au‑S键修饰在电极/AuNPs表面,经封闭液封闭非特异性活性位点后,形成电极/AuNPs‑Apt。

6.权利要求5所述的检测胰岛素的电化学适配体传感器的使用方法,其特征在于,步骤如下:

a.将电极/AuNPs‑Apt传感器先后浸泡于胰岛素的标准溶液、核酸外切酶Ⅰ溶液和AuNPs‑Apt探针溶液中孵育,经冲洗后得到电极/AuNPs‑Apt/insulin/AuNPs‑Apt电化学适配体传感器。

b.将电极/AuNPs‑Apt/insulin/AuNPs‑Apt电化学适配体传感器浸泡在含有亚甲基蓝溶液的Tris‑HCl缓冲溶液中,调节pH后,清洗并作为工作电极,在Tris‑HCl缓冲溶液中进行电化学DPV检测,根据所得的峰电流大小与胰岛素的标准溶液之间的关系,绘制工作曲线;

c.检测原待测样品的浓度,然后向其中添加胰岛素,按照a、b操作进行检测,将检测出来的电流信号带入步骤b得到的工作曲线,得到待测样本中胰岛素的浓度。

7.根据权利要求6所述的检测胰岛素的电化学适配体传感器的使用方法,其特征在于:所述步骤a中电极为激光打印石墨烯电极或玻碳电极,激光打印石墨烯电极/AuNPs‑Apt浸泡在一系列浓度为0.05pM‑1μM的胰岛素的标准溶液中,玻碳电极/AuNPs‑Apt浸泡在一系列浓度为0.02pM‑5.0μM的胰岛素的标准溶液中,胰岛素溶液中孵育时间为40‑60min,核酸外切酶Ⅰ溶液的浓度为1.25‑1.50U/μL,孵育温度为36‑38℃,孵育时间为2.5‑3.0h,探针溶液中孵育时间为15‑25min。

8.权利要求6所述的检测胰岛素的电化学适配体传感器的使用方法,其特征在于:所述步骤b中亚甲基蓝溶液的浓度为30‑50μM,Tris‑HCl缓冲溶液的浓度为0.95‑0.15M,Tris‑HCl缓冲溶液pH值为7.3‑7.5,浸泡时间为10‑20min。