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专利号: 2021111693992
申请人: 徐州工程学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-30
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种用于提高微生物法制备3‑羟基丙酸产率的诱导剂,其特征在于,向培养重组汉逊德巴利酵母的液体培养基中添加质量分数为45‑55%餐厨废弃油脂和0.05‑0.12%维生素B12,构建提高微生物法制备3‑羟基丙酸产率的诱导剂。

2.如权利要求1所述的诱导剂,其特征在于,所述重组汉逊德巴利酵母的制备包括以下步骤:

将3‑磷酸甘油脱氢酶基因gpd1导入质粒pET‑28a,构建pSE‑gpd1,再将3‑磷酸甘油酯酶基因hor2连接到pSE‑gpd1,构建pSE‑gpd1‑hor2,然后将其转染大肠杆菌,并在35‑37℃摇瓶发酵培养16‑20h,得到重组大肠杆菌;

将汉逊德巴利酵母在30‑32℃摇瓶发酵培养16‑20h,然后将上述两种菌液等体积混合,

30‑32℃培养25‑30min后涂布在含有氨苄青霉素和卡那霉素的LB平板上培养20‑25h以进行接合转化,挑取单克隆进行鉴定,得到转入pSE‑gpd1‑hor2的重组汉逊德巴利酵母。

3.如权利要求1所述的诱导剂,其特征在于,所述液体培养基还包括葡萄糖10‑15g/L、酵母浸膏3‑5g/L、(NH4)2SO4 5‑10g/L、KH2PO4 2.0‑3.0g/L、MgSO4·7H2O1.5‑2.3g/L、FeSO4·

7H2O 0.01‑0.02g/L。

4.如权利要求1所述的诱导剂,其特征在于,所述诱导剂的pH为4.5‑5.0。

5.利用权利要求1‑4任一项所述的诱导剂提高微生物法制备3‑羟基丙酸产率的方法,其特征在于,包括以下步骤:

将重组汉逊德巴利酵母接种液体培养基培养16‑20h得到种子液;再将种子液按照体积分数6.8‑10%接入新鲜的液体培养基,并在所述液体培养基中添加质量分数为45‑55%餐厨废弃油脂和0.05‑0.12%维生素B12,扩大培养5‑7天,获取发酵液;其中,所述的餐厨废弃油脂均分为两份,在培养0h和72h时分别加入;

检测所得发酵液中的3‑羟基丙酸含量。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,还包括在发酵72h时补充葡萄糖的步骤,按照葡萄糖:液体发酵培养基为(10.0‑23.5)g:1L的配比补充。

7.如权利要求5所述的方法,其特征在于,培养方式采用间歇式转动培养,在0‑24h内采用80‑120r/min转动方式培养,之后停止转动20‑30min,再继续采用130‑160r/min转动方式培养,持续转动至第90h,之后停止转动20‑30min,再继续采用80‑120r/min转动方式培养至发酵结束。

8.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述重组汉逊德巴利酵母的出发菌为汉逊德巴利酵母,保藏编号为CGMCC No.11893。